环境因子对鳗弧菌生物膜形成的影响.PDFVIP

微生物学通报 Jan. 20, 2018, 45(1): 138−145 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.170214 研究报告 环境因子对鳗弧菌生物膜形成的影响 1 1 1,2 1 1 1 1* 尹清干 程俊茗 刘腾飞 董龙香 苏惠冰 胡鲲 杨先乐 (1. 上海海洋大学国家水生动物病原库 上海 201306) (2. 藁城区农林畜牧局 河北 石家庄 052160) 摘 要：【背景】鳗弧菌是海产动物弧菌病的主要病原，在海水水域中广泛存在。鳗弧菌为了 适应环境变化会生成生物膜，形成自我保护，对其防治是水产养殖行业的一大难题。【目的】 探讨致病性鳗弧菌( Vibrio anguillarum) BYK0638 生物膜的形成特性，为进一步研究鳗弧菌生物 膜形成机制和致病机理提供参考。【方法】采用改良的微孔板法研究静置培养条件下鳗弧菌( V. anguillarum) BYK0638 在96 孔酶标板上的成膜情况，CCK-8 法(Cell counting kit-8)定量检测生 物膜中鳗弧菌的活力。【结果】鳗弧菌 BYK0638 能够在聚苯乙烯酶标板上形成稳定而明显的 生物膜，其生物膜的OD 7 8 450 值在24 h 达到峰值，60 h 后趋于稳定；在 10 −10 CFU/mL 范围内， 鳗弧菌生物膜的OD450 值显著高于其他试验组(P0.05)；25 °C 时的生物膜OD450 值显著高于其 他温度生物膜的形成量；在pH 4.0−11.0 范围内，当pH 值为7.0 时鳗弧菌形成的生物膜量最高， 在pH 值为3.0 和12.0 时鳗弧菌几乎不形成生物膜；在TSB 培养基中加入0.03−2.00 mmol/L CaCl2 ， 鳗弧菌生物膜形成量与未添加 CaCl2 对照组无显著性差异；在 TSB 培养基中加入 0.03 mmol/L MgCl2 ，可促进鳗弧菌生物膜形成；NaCl 浓度为 5%时，形成的生物膜 OD450 值最高；鳗弧菌 在大黄鱼表皮黏液、肝脏、前肠、后肠组织提取液包被的 96 孔酶标板上形成的生物膜显著高 于其他黏液和组织提取液包被组(P0.05) 。【结论】致病性鳗弧菌BYK0638 能形成稳定而明显 的生物膜，其生物膜形成与外界环境因子变化有密切的关系，培养时间、初始菌浓度、温度、 2+ pH 、Mg 、盐度及不同组织和黏液等各种环境因子均能显著影响鳗弧菌生物膜的形成。 关键词：鳗弧菌，生物膜，环境因子 Characteristics of biofilm formation of pathogenic Vibrio anguillarum YIN Qing-Gan1 CHENG Jun-Ming1 LIU Teng-Fei 1,2 DONG Long-Xiang1 SU Hui-Bing 1 1 1* HU Kun YANG Xian-Le (1. National Pathogen Collection Center for Aquatic Animals, Shanghai Ocean Unive