熊果酸对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究.docVIP

精品论文 参考文献 熊果酸对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究 陈鹏 丁志杰 　　邯郸市中心医院 056001 　　摘要 目的：探讨熊果酸（UA）对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护用及其作用机制。方法：采用四动脉结扎法制备全脑缺血再灌注大鼠模型，选取80只模型大鼠随机分为模型对照组、熊果酸（40、80和120 mg/kg）治疗组，并另取20只同龄大鼠做为假手术组；各组大鼠均于插入栓线后立即通过尾静脉注射给药。结果：与模型对照组相比，熊果酸（80、120 mg/kg）能够改善全脑缺血再灌注大鼠学习能力、促进翻正反射和脑电的恢复、降低脑组织含水量、抑制脑组织病理形态学改变；熊果酸（80、120 mg/kg）能够改善脑组织中SOD、CAT活性，降低LDH、MDA含量，降低TNF-alpha;、IL-6含量，其中120 mg/kg 治疗组IL-1beta;含量显著降低，差异均具有统计学意义（Plt;0.05，Plt;0.01）。结论：熊果酸对大鼠全脑缺血再灌注损伤具有剂量依赖性的保护作用，其作用机制可能熊果酸能够有效改善抗氧化酶系统活性、减轻自由基损伤，抑制炎症反应有关。 　　关键词 熊果酸；全脑缺血再灌注；保护作用；机制 　　中图分类号：R96文献标识码：A 　　1 材料与方法 　　1.1 试验药物与试剂 熊果酸购自陕西慧科植物开发有限公司（批号：120417，纯度ge;98%）； LDH、MDA、SOD、CAT试剂盒购自南京建成生物工程研究所；氯化-2, 3, 5-三 　　苯基四氮唑（TTC）购自中国医药集团上海化学试剂公司；TNF-alpha;、IL-1beta;、IL-6 EILSA检测试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司；其余试剂均为分析纯。 　　SCXK（冀）2008-1-003，动物批次号：1307008。 　　1.3 主要仪器 全自动生化分析仪（武汉精诚伟业医疗设备有限公司）；UV-1200 紫外-可见光分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；BL-420E生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）；Morris水迷宫（中国医学科学院药物研究所）；IKA T10 高速组织匀浆机（广州仪科实验室技术有限公司）；石蜡切片机（德国SLEE公司）。 　　1.4方法 　　1.4.1模型的制备与分组 选取80只大鼠模型随机分为模型对照组和熊果酸（40、80和120 mg/kg）治疗组，每组20只；另取20只同龄正常大鼠作为假手术组，假手术组行手术通路，但不做缺血处理。熊果酸各治疗大鼠均于插入栓线后立即通过尾静脉注射给药，模型对照组和假手术组分别给予等体积的生理盐水。 　　1.4.2 行为学研究 再灌注6h后，通过Morris水迷宫试验测定各组大鼠学习记忆能力，于水温（21plusmn;2）℃中，首先进行训练，分别从4个不同位置放入水迷宫，若大鼠在180s内未找到平台，将其引至平台并停留10 s，则寻台潜伏期记为180 s；然后进行测试，任意选定位置，以寻台潜伏期作为大鼠空间记忆成绩，测定三次，取平均值。 　　1.4.3翻正反射和脑电恢复时间 再灌注后，观察翻正反射恢复时间，并通过BL-420E生物机能实验系统测定各组大鼠脑电图振幅，观察脑电恢复时间。 　　1.4.4脑组织含水量的测定 再灌注6h后，断头取脑，去除嗅球、小脑和低位脑干，称定大脑湿重量，然后置于110℃恒温干燥箱中烘烤48h后称定干重量。计算公式：脑含水量=[（湿重量-干重量）/湿重量]times;100% 　　1.4.5脑组织形态学变化的观察 再灌注6h后，参照1.4.4方法取脑组织，置于4%多聚甲醛溶液中进行固定、石蜡包埋、切片，然后行常规HE染色，通过光学显微镜观察脑组织形态学变化。 　　1.4.6脑组织中LDH、MDA含量和SOD、CAT活性的测定 再灌注6h后，参照1.4.4方法取脑组织，剪碎后进行研磨匀浆，经3000 rpm离心10min后，取上清液，按试剂盒操作步骤，通过生化检测仪测定血清中LDH含量，通过紫外-可见分光光度计测定血清中MDA的含量和SOD、CAT活性。 　　1.4.7脑组织中TNF-alpha;、IL-1beta;、IL-6含量的测定 取1.4.6所制备的脑组织匀浆液，按ELISA试剂盒操作步骤测定脑组织中TNF-alpha;、IL-1beta;、IL-6含量。 　　1.4.8 统计学方法 实验数据均以 形式表示；运用SPSS13.0进行统计分析，采用单因素方差分析进行检验；Plt;0.05表示差异有统计学意义，Plt;0.01表示有极显著性差异。 　　2 结果 　　2.1各组大鼠学习记忆能力的变化 较假手术组，模型对照组大鼠寻台潜伏期显著升高；而经熊果酸（80、120 mg/kg）治疗后，全脑缺血再灌注损伤大鼠寻台潜伏期显著缩短，