基因免疫制备抗H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体研究.pdfVIP

基因免疫制备抗H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体。 詹爱军，王敬师，李少璃，于康震，曹永长，毕英佐# (华南农业大学基因工程实验室，广东广州510640) 进行重组。以重组质粒作为基因疫苗免疫8周龄Balb／c小鼠，应用杂交瘤技术进行细胞融合，通过血凝抑制试验(HI)和 ELISA试验筛选，各获得一株阳性细胞株，经三次亚克隆后都能稳定分泌H9AIV特异性抗体。特异性检测表明单抗与NDV， H5亚型AIV、产蛋下降综合征(EDS76)病毒毒株没有反应，两株单抗经亚型鉴定均为IgG2b，轻链亚型为kappa链。 [关键词] 禽流感病毒；H9亚型}血凝素；单克隆抗体；基因免疫 禽流感(AvainInfluenza，AI)是由A型流感病1．2酶类及其他试剂Ex DNA聚合酶 Taq dNTPsHindIBamHI DNAMarker 毒引起的一种病毒性传染病E13，给世界养禽业造 DL2000 成巨大的经济损失。自1993年以来在我国部分地区 的鸭、鹅、鸽、珍禽中经血清学调查证实有AIV阳性 (EB)购至宝泰克生物科技有限公司；E．Z．N．A Gel 鸡群存在或已分离到H9亚型流感病毒[2—7]，近 Kit(200)E．Z．N．A PlasmidMinipreps 年来，已经证实中等毒力以下H9亚型禽流感在我 Extraction 国广泛存在，造成了家禽业的重大损失，同时也给公 养基IMDM和降植烷为GibcoBRL公司产品；新 共卫生安全造成潜在的威胁，1999年曾发生AIV生小牛血清购自杭州四季青生物工程材料研究所。 Mouse Test H9N2亚型感染人的事件更引起了人们的关注Es]。 M曲IsotypingKit购自HyCult b．v公司。 目前，国内外利用单克隆抗体(mAb)检测AIV的biotechnology 研究已有报道E9-11]。 1．3引物设计与合成 HA Barry等用hGH基因免疫小鼠，并用免疫鼠脾参照GeneBank上已发表的H9亚型AIV 细胞建立了杂交瘤，最终成功地获得了分泌抗hGH 基因序列设计引物，序列如下： 抗体的单克隆细胞株[1纠。基因免疫的应用为单克隆 TCTGCATC 抗体的研制开辟了一条新的途径。本试验利用H9 3’。 亚型禽流感病毒(AIV)HA基因真核表达质粒 TTGCATCT 3’ (pcDNA3．1_H9)免疫雌性BALB／C小鼠，制备抗 H9亚型禽流感病毒(AIV)HA的单克隆抗体，为进由上海搏亚生物技术有限公司合成，预计片段 一步建立H9亚型禽流感快速鉴别诊断试剂盒奠定 长度1680bp。 了基础。 1．4H9基因PCR扩增PCR反应体系如下：P1／ Buffer P2各2#L，ExTaq酶0．5肛L，10×Ex