鹅源新城疫病毒HN基因在Bac to Bac系统中的表达及抗原性检测.pdfVIP

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2018-05-07 发布于福建
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鹅源新城疫病毒HN基因在Bac to Bac系统中的表达及抗原性检测.pdf

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第 41卷第 5期东北农业大学学报 4lf51：107-111 2010年 5月 JournalofNortheastA euhuralUniversity Mav2010 鹅源新城疫病毒HN基因在BaetoBae系统中的表达及抗原性检测杨雪晶，鞠环宇，高明春，马波，王君伟 (东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 150030) 摘要：血凝素一神经氨酸酶蛋白(HaemagglutininNeuramindase，HN)是鹅源新城疫病毒诱导体液免疫的重要靶抗原。经pMD18一T—HN阳性质粒扩增了HN基因，扩增的片段亚克隆到转座栽体 pFastHTb中构建重组转座载体DFastHTb—HN。将其转化到DH10Bac感受态细胞中，得到重组杆粒 rBacmid—HN，重组杆粒 rBacmid—HN转染 sf9昆虫细胞，收获的重组病毒盲传两代。PCR鉴定重组病毒，获得的重组杆状病毒命名为rBv—HN。经间接免疫荧光(IFA)和SDS—PAGE鉴定，获得的重组杆状病毒rBv—HN在 sf9昆虫细胞中获得表达，且表达的蛋白大小为 75ku左右，与理论值相当。Westernblot和Dot—ELISA检测结果表明，表达的蛋白可与鸡抗NDV血清发生特异性抗原反应，证实所表达的蛋白具有良好的反应原性。关键词：鹅源新城疫；日Ⅳ基因；BactoBac；抗原性中图分类号：$853 文献标志码：A 文章编号：1005—9369(2010)05—0107—05 BactoBacexpressionandantigenicitydetectionofHN geneofNDV of goose／YANGXuejing，JUHuanyu，GAOMingchun，MABo，WANGJunwei(CollegeofVeterinary Medicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China) Abstract：HaemagglutininNeuramindase(HN)proteinistheimportantantigenofNewcastalDeases Virusofgoosewhichcaninduce humoralimmun．1y．Amplified HN gene accordingtothepMD18-T—HN， amplifiedthebaculovirusrecombinanttransfervectorpFastHTb-HN wereconstructedbysubclonningthe amplifiedrfagmentintothetransfervector．The recombinanttransfervectorsWaStransformed into the receptorcellsandtherecombinantbacmidwasacquired．W etransfectedthe recombinantrBacmid—HN into insectsf9 cells and harvested．The viruswas furtheramplified by propagation in sf9 cells，the recombinantvirusidentifiedbyPCR．andnamedasrBv—HN．Therecombinantbaculoviruswereshownto beefficientlyexpressed insf9cellsbydetectingwith indirectimmunofluorescentassayandSDS—PAGE． Theproteinofapproximately75kuwasdetectedwhich inaccordwiththeoreticalvalues．Specificantigen