[生物学]生物化学01蛋白质化学.ppt

基本氨基酸的分类 反应特点 A. 为α- NH2的反应 B. 在常温，中性条件，甲醛与α- NH2很快反应，生成 羟甲基衍生物，释放氢离子。 应用：氨基酸定量分析—甲醛滴定法（间接滴定） A.直接滴定，终点pH过高（12），没有适当指示剂。 B.与甲醛反应，滴定终点在9左右，可用酚酞作指示剂。 C.释放一个氢离子，相当于一个氨基（摩尔比1：1） D.简单快速，一般用于测定蛋白质的水解速度。 反应特点 A.为α- NH2的反应 B. 在弱碱性条件下，与DNFB发生芳环取代，生成二硝基苯氨基酸 应用：鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸。 首先由Sanger应用，确定了胰岛素的一级结构。 补充：氨基酸混合物的分离 一、层析技术 纸层析、薄层层析、离子交换层析、高效液相层析 二、电泳技术 纸电泳 一、层析技术 层析技术又称色谱技术（Chromatography），是一种根据被分离物质的物理、化学及生物学特性的差异，使它们在某种基质中移动速度不同而进行分离和分析的方法。例如：我们利用物质在溶解度、吸附能力、立体化学特性及分子的大小、带电情况及离子交换、亲和力的大小及特异的生物学反应等方面的差异，使其在流动相与固定相之间的分配系数（或称分配常数）不同，达到彼此分离的目的。  1. 层析技术的分类 根据固定相基质的形式分类，层析可以分为纸层析、薄层层析和柱层析。 ? 根据流动相的形式分类，层析可以分为液相层析和气相层析。 根据分离的原理不同分类，层析主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。 吸附层析是以吸附剂为固定相，根据待分离物与吸附剂之间吸附力不同而达到分离目的的一种层析技术。 分配层析是根据在一个有两相同时存在的溶剂系统中，不同物质的分配系数不同而达到分离目的的一种层析技术。 凝胶过滤层析是以具有网状结构的凝胶颗粒作为固定相，根据物质的分子大小进行分离的一种层析技术。 离子交换层析是以离子交换剂为固定相，根据物质的带电性质不同而进行分离的一种层析技术。 亲和层析是根据生物大分子和配体之间的特异性亲和力（如酶和底物、抗体和抗原、激素和受体等），将某种配体连接在载体上作为固定相，而对能与配体特异性结合的生物大分子进行分离的一种层析技术。亲和层析是分离生物大分子最为有效的层析技术，具有很高分辨率。 基本步骤： 装柱 上样 分步洗脱 分步收集 二、电泳 氨基酸在pH高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过氨基酸在电场中泳动而达到分离各种氨基酸的技术, 称为电泳。 分离氨基酸混合物常用纸电泳。 （二）肽单元 　氮原子上的孤对电子与羰基具有明显的共轭作用，肽键中的C-N键具有部分双键性质，不能自由旋转。所以连接在肽键两端的基团处于一个平面上，这个平面称为肽平面。在大多数情况下，相邻肽平面以反式结构存在。 相关名词： 肽单元：参与肽键的6个原子被约束于一个平面上，与此相应 　　　　　的-Cα-CO-NH-Cα-则称为肽单元 。 多肽主链：在多肽链中由肽键连接的各氨基酸残基形成的长 　　　　　　链骨架(…Cα-CO-NH-Cα….)为多肽链的主链。 　　　　　　或：肽链的骨干是由肽单元重复排列而成长链， 　　　　　　称为主链。 多肽侧链：在多肽链中的各氨基酸残基所连接的侧链基团　　　　　为多肽侧链。或：氨基酸残基的R-基连在主链上 　　　　　　成为侧链。 　　说明：各种不同的肽链主链都是一样的，但侧链（R-基）　　　　的顺序即氨基酸的顺序各不相同 。 蛋白质的一级结构(Primary structure)包括： (1)组成蛋白质的多肽链数目; (2)多肽链的氨基酸顺序; (3)多肽链内或链间二硫键的数目和位置。 ★其中最重要的是多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础。 蛋白质的空间结构 蛋白质分子的多肽链按一定方式折叠、盘绕或组装成特有的空间结构，亦称高级结构。蛋白质的高级结构即蛋白质的构象。 构象是指相同构型的化合物中，与碳原子相连的各原子或取代基团在单键旋转时形成的相对空间排布。构象的改变不需要共价键的断裂和重新形成，只需单键的旋转即可形成新的构象。 酰胺平面与α-碳原子的二面角（ φ和ψ ） 维持蛋白质分子构象的作用力 （九）蛋白质的超二级结构 （1）超二级结构的概念 指蛋白质中相邻的二级结构单位(即单个?-螺旋或?-转角)组合在一起，形成有规则的在空间上能辩认的二级结构组合体。