实验三 单向琼脂扩散实验.pptVIP

单向琼脂扩散实验;教学对象：强化班学生 实验课时：3学时 课程类型：专业实验课 课程要求：必修 每组人数：4人;实验目的与要求;实验原理： 将适量的抗体均匀混入琼脂内制成琼脂板，打孔，在孔中加入一定量的待测抗原，抗原向四周呈辐射状扩散，与抗体相遇，在比例合适时形成白色沉淀环。沉淀环直径的大小与抗原含量成正比，用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线，从标准曲线上，可以查出待检样品中抗原的含量。本试验主要用于检测标本中各种免疫球蛋白和血清中各种补体成分的含量，敏感性很高。;试剂与器材 羊抗人IgG血清 待检人血清 标准参考血清 pH7.4 0.01M PBS缓冲液 琼脂粉 载玻片、打孔器、 37℃恒温箱、湿盒、可调微量加样器等； ;实验方法;结果计算;;实验结果;实验结果;注意事项： 制备抗体琼脂板时，琼脂温度必须严格控制，温度太低琼脂会凝固，太高则会影响抗体的活性； 加样孔内的琼脂应挑干净，切不可损坏孔的边缘，确保每孔的液面基本一致； 加样量一定要精确，并且不能逸出孔外，否则结果不好观察； 加样时，吸取每份标本均应更换塑料吸头； 实际检测过程中，标准曲线必须与样品测定同时制备； 孵育时间应控制在24~48小时，时间太短可能产生不了沉淀线，时间太长会造成沉淀线的扩散。