甲醛固定与微波固定在消化道内分泌细胞免疫组织化学染色中的比较.docVIP

精品论文 参考文献 甲醛固定与微波固定在消化道内分泌细胞免疫组织化学染色中的比较 （1.漯河医学高等专科学校 河南 漯河 462000；2.漯河市中心医院 河南 漯河 462000） 摘要：目的：通过比较探讨微波固定在消化道内分泌细胞免疫组化染色中的方法。方法：应用不同强度的微波辐射与常规福尔马林方法固定组织，并石蜡切片免疫组化染色观察。结果：常规福尔马林固定经抗原修复后，经染色内分泌细胞呈棕黄色，不经抗原修复内分泌细胞能着色，用微波辐射低档达45℃、55℃、70℃固定的组织都能被着色。结论：微波固定组织切片染色效果明显优于常规福尔马林固定组织，使固定时间缩短，提示微波固定的材料能很好的保存抗原。 关键词：微波; 石蜡切片; 消化道; 内分泌细胞 [中图分类号]R4 [文献标识码] A 文章编号： 微波辐射能使液体中极性分子高频振动，增加液体分子间的摩擦和碰撞，从而使液体内部迅速产热和某些化学反应加快。许多作者利用此原理进行了微波辐射固定组织、微波辐射与固定液结合固定组织和微波促进组织染色的实验等[1-9]，均取得良好的效果。但微波辐射固定某些特定组织在免疫组化染色中的具体方法报道还很少，为了拓展微波在组织切片中的应用，作者探讨了微波辐射固定胃肠内分泌细胞在免疫组化中的具体方法。比较甲醛固定与微波固定在消化道内分泌细胞的不同。说明用微波固定胃肠内分泌细胞比常规固定时间缩短，这使免疫组织化学对生物医学基础研究、预防、临床医学的研究、军事医学的应用研究都有重要的价值。 1.材料与方法 1.1材料与主要仪器 取蟾蜍的胃、肠为实验材料，海尔牌H-R7751MS型家用微波炉（750W，分6档）为辐射仪器,0.01mol/LPBS液(pH7.4),0.01mol/LpH6.0柠檬酸缓冲液(CB),羊血清(北京博奥森生物技术有限公司),一抗(胃泌素.福州迈新生物技术开发有限公司;5-HT.博士德生物工程有限公司),二抗Maixin试剂(北京博奥森生物技术有限公司),DAB显色试剂盒(试剂A浓缩缓冲液,试剂B浓缩DAB溶液,试剂C浓缩过氧化氢溶液)。 1.2固定方法 将材料分成14个组，8个对照组，6个实验组，8个对照组是内分泌细胞常规福尔马林固定方法，各个实验组分别用不同强度的微波辐射，以便突出实验组微波辐射的效果。各组材料固定方法见附件表1。为了防止材料在微波辐射时因温度升高过快组织内产生气体而损伤组织，一般控制微波辐射在2分钟间升高至设计温度。为了使实验组较准确的达到设计温度，先用生理盐水在微波炉内进行各档微波辐射测试，找出符合实验设计的微波辐射档次和恰当的辐射时间。微波辐射的档次是根据微波辐射时间和最高温度设计并预先测试后而选定的。微波辐射方法：根据微波穿透深度特性，将实验1、2、3、4、5、6组材料放于小白广口瓶（容量60ml）内加20ml生理盐水，而后放在内盛400ml水的玻璃器皿上方并一同放入微波炉内，低档辐射达预定温度。 2.结果 2.1对照组 组织结构与透明：胃肠壁组织结构完整，透明良好，各类细胞均有一定程度的收缩。结缔组织内常有较大的空隙，腺管腔常扩大，肠黏膜上皮间有一定裂隙。组织着色：对照组的内分泌细胞经免疫组化染色呈棕黄色，结缔组织与其他的结构不着色。对照1、3、5、7组比对照2、4、6、8组效果更明显。 2.2实验组 实验3、4组组织结构与透明：胃壁组织无损伤，基本透明，细胞无收缩，胞质均匀，胞间隙与各腺管腔正常，胞间隙清晰，内分泌细胞正常，透明清晰。组织着色：内分泌细胞着色比对照组着色深，其他细胞不着色。从整体效果看，组织完整性好，细胞形态好，内分泌细胞着色深，效果优于对照组。实验5、6组组织透明性好，胃壁黏膜表层有损伤，细胞显著膨胀，免疫组化染色内分泌细胞着色。结缔组织与其他组织不着色。实验1、2组胃壁黏膜多与其他层次脱离，内分泌细胞也可染色，透明较差。 3.讨论 通过以上实验5、6组提示胃黏膜浅层损伤，结缔组织损伤和内分泌细胞膨胀可能是微波辐射过量所致。实验1、2组提示胃黏膜与其他组织脱离，组织透明不良，可能是组织固定不够所致。实验3、4组组织结构完整性与染色均良好，提示单独微波辐射能良好的固定内分泌细胞，微波达55℃是理想的微波辐射量。组织完整性好，透明好，细胞无损伤，无收缩，胞质均匀，经免疫组化染色鲜明。常规福尔马林固定使细胞有一定的收缩，能使内分泌细胞着色，而微波辐射固定既能保持细胞正常的形态和结构，经免疫组化染色又能使内分泌细胞着色。说明微波辐射既能良好的固定内分泌细胞，又能很好的保护组织细胞的形态和结构。免疫组化是利用抗