兜兰的杂交和无菌播种技术.docVIP

兜兰的杂交和无菌播种技术 　　浙江　徐刚／编译 　　兜兰播种很难发芽，即使发芽其发芽率也非常低，其原因是成熟种子表面附着一层发芽抑制物质。为了避免这种情况，建议采用未成熟种子进行播种。 　　自花授粉种、同一品种内不同株系间的杂交种、不同近缘种间的杂交种的发芽率比较好，但杂交种再进行杂交的杂交种的发芽率一般较低，特别是远缘杂交种中大部分多为不育性。这样，通过杂交和播种试验可得到充分了解。 　　 　　一、花的构造和杂交方法 　　 　　为了进行杂交，首先要了解花的构造。特别是通过实际的花的解剖确认花粉块(a)、柱头(b)、唇瓣(c)等的位置和形态。一旦确定要进行杂交的植株，将花粉(雄蕊)给花的柱头(雌蕊)授粉。为了杂交工作容易，最好去掉柱头一侧的唇瓣。但是为了保持花的观赏价值，授粉时，将下萼片开个孔，从背后将花粉给柱头授粉。 　　杂交方法非常简单： 　　1、用牙签等取出花粉块 　　2、放入柱头部的塌陷处 　　杂交时，作为母本的植株，开花后至少经过4～5天为好。另外，由于要经过半年多时间，种子在子房内发育成熟，希望植物十分健壮地生长，用油性记号笔或铅笔在标签牌上记上亲本名称、杂交日期等，挂在花茎上。 　　 　　花粉 　　杂交用的花粉，是开花后至少经过1周(一般经过1～3周)时间的花粉。刚开花后的花粉，未成熟、色白、无粘着性。另一方面，利用价值高的杂交亲本的花粉可以进行冷冻(－20℃～－70℃)保存。特别是对于花期不同的亲本进行杂交是最有效的方法。在－20℃冷冻保存条件下可保存1年时间，在－70℃冷冻保存条件下可半永久性保存。在-70℃冷冻保存条件下保存了3年的花粉进行杂交取得了良好的结果。要注意保存的花粉要新鲜，若不新鲜，花粉块粘着性下降。 　　 　　二、成熟时期 　　 　　杂交后，子房逐渐变硬长大。采用未成熟(未开裂)种子播种时以杂交后6～8个月后的种子为好。这时的子房还未着色。随着进一步成熟(10个月左右)子房先端开始变褐，然后子房开裂，种子向四周飞散。采用完熟(开裂)种子灭菌后进行播种的方法不可取。因为播种操作麻烦，建议初学者采用未成熟种子进行播种。在成熟期间植株放置的环境对种子成熟的影响很大。在多数情况下，种子成熟期间植株要经过炎热的夏天。若夏天环境不适，种子未十分成熟，蒴果提早开裂。若夏天凉爽子房要经过1年时间子房才变褐色。在这种情况下多数种子已成熟。 　　 　　三、无菌播种 　　 　　1、准备 　　(1)培养基配制：三角烧瓶(300ml～500ml)、橡皮塞(中央开1个直经3mm～5mm的小孔，塞上脱脂棉)； 　　(2)培养基：如表一所示； 　　(3)接种；锡铂纸、滤纸、刀片、镊子、金属匙、接种针、蒸馏水、吸管(1ml～5ml)、吸管胶球； 　　(4)灭菌：烧杯(100ml～250ml)、氯溶液(次氯酸钠溶液，有效氯5％以上；漂白粉也可用)、75％酒精、高压灭菌器、压力锅、超净工作台(无菌箱)。 　　 　　注意：锡铂纸、滤纸、刀片、镊子、金属匙、接种针等用锡铂纸包好在高压灭菌器内灭菌，无菌水是三角烧瓶装蒸馏水后用橡皮塞塞好再灭菌(但橡皮塞不能完全塞紧，灭菌时若橡皮塞塞紧，由于蒸气压力橡皮塞可能会冲出，使三角烧瓶破裂)。 　　 　　2、无菌播种 　　无菌操作原则上在超净工作台或在无菌箱内进行。使用自制的无菌箱时，在使用前用药剂充分消毒，再利用煤气灯或酒精灯。操作时，手经过橡胶手套伸进无菌箱内，使用完全密封的箱子时，不需要煤气灯；将必要的材料(包括种子、苗)放入箱内后，用氯仿、次氯酸钠溶液等进行喷雾，再将药剂放入箱内静置，密闭10～30分钟。由于该无菌箱使用固定的橡胶手套，操作虽自由，但材料、器具搬进搬出受到限制。本文详细介绍最一般使用的超净工作台或利用煤气灯的操作方法。在使用煤气灯时，操作尽量在煤气灯的附近，靠近火焰一侧或稍稍下方处。 　　 　　 　　四、未成熟种子(未开裂种子)的无菌播种 　　 　　1、种子的灭菌 　　(1)剥去子房外的苞片； 　　(2)切取适当长度(3cm)的花梗； 　　(3)子房放在煤气灯的火焰上烧掉于房上的细毛。去掉覆盖在子房上的细毛，有利于后面的无菌操作。 　　(4)在75％酒精中浸1分钟； 　　在酒精中浸一下目的不是进行灭菌，而是有利于后面的消毒剂的灭菌；酒精灭菌虽可杀死许多细菌，但对真菌和一部分细菌无效。 　　(5)次氯酸钠等溶液灭菌5分钟。 　　灭菌液的浓度和灭菌时间有关系。初学者以使用高浓度较为安全，使用原液也无妨。灭菌操作后，后面的操作都必须无菌操作，应十分小心。 　　(6)打开用锡铂纸包好的灭菌滤纸。 　　锡铂纸的外面可用干净的手接触，但纸的内部不可接触。用干净的手或镊子拿住花茎的先端，将子房放到滤