细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因的克隆和序列分析.PDFVIP

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2018-11-27 发布于天津
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细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因的克隆和序列分析.PDF

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细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因的克隆和序列分析

29　4 　 2007 8 Journal of Ningxia Medical College ·337 · :1005-8486(2007)04-0337-03 ·· P-29 师志云, 　王娅娜, 　马　锐, 　于晶晶, 　于辛酉, 　高　岭, 　赵　巍 (, 　750004) :目的　(E.granulosus)(diagnostic antigen)P-29 。方法　 RNA, GenBank P-29, RT-PCR P-29 , pGEM-T 。结果　 P-29 , 7 7bp , , 00%, 00%。结论　P-29 , 。 :;P-29 ;; + :R383.3 3　　　:A 　　(Echinococcosis)(Cystic 。 echinococcosis, CE), (Echinococcus granu- ..4 　RT-PCR :GenBank losus,Eg) P-29 (GenBank : 。, AF07893), DNAMan :P :5ATGGATC- [ ] 、。 CATGTCCGGATTTGACGTTAC 3 , P2: 5 GTGCGGCCGCC- 、、、, TACTCGCCCAGCATCATA 3。 [2] 0 。, , , 2 , , BamHI Not I , 。。, .2　 , .2.　RNA : 。 200mg, (Total RNA Isolation Sys- P-29 tem)RNA。 , , .2.2　(RT-PCR)::5 。 ×Buffer 0μL, 0Mm dNTP μL, 25mM MgSO 2μL,AMV μL,Tfl 4 1　 μL, 2 2μL, RNA 2μL, DEPC 29μL。 .　 :48 ℃45min, 94℃2min;94℃ 30s, 60℃ min, 68 ℃ ..　: 2min,40 ;68℃7min。, PCR , %, 。 , PBS(pH7.2)3 ,-85 ℃。 .2.3　PCR :DNA ..2　:pGEM-T Promega 。 PCR 。DNA pGEM-T T 4 E.coli JM 09 。 , 4℃。 E.coli ..3　: BamHI、NotI、X-gal、IPTG、 JM 09 , IPTG X-gal RNA 、RT-PCR Promega , 2×AMP YT , , 37℃。 DNA 、DNA Marker、λDNA /Hind ⅢMarker .2.4 　:, , , BamHI Not I 。 :2006-11-11 .2.5　:P-29 :(:30260 05); , NCBI/ (NZ0540) GenBank blast 。 :(982-), , , , 。