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目 录
中文摘要……………………………………………………………………………………1
英文摘要……………………………………………………………………………………3
符号说明……………………………………………………………………………………5
—’上. .’.
刖 吾……………………………………………………………………………………………………………………6
材料与方法………………………………………………………………………………一13
结 果……………………………………………………………………………………..41
讨 论…………………………………………………………………………………………………………………50
结论……………………………………………………………………………………一56
附录……………………………………………………………………57
参考文献………………………………:………………………………………………….61
致谢……………………………………………………………………………………..65
攻读学位期间发表的学术论文…………………………………………………………..66
原创性声明………………………………………………………………………………一67
ⅧIlllrllfllIlllrl
iiiiIIIliIIIIIllflllIII|lIIIFl+if llll
小鼠白细胞介素17A原核表达系统的构}J1
研究生: 姜 川I
专 业: 神经病学
导 师: 曹秉振教授
中文摘要
目的
白细胞介素l 7,IL.1
7(interleukin一17)是近年来新发现的炎性细胞因子,
具有多种生物学活性,是某些疾病发生和发展的重要因素之一,受到了人们
的广泛关注。IL一17是一种主要由T细胞产生,通过表达与许多细胞上的受
体发挥作用的蛋白质。人IL.1
7是一种同源二聚多肽,主要由活化CD4+‘记忆
T细胞分泌产生。小鼠1L.17的总长度为l58个氨基酸残基,其中21个氨基
酸残基组成其前导信号序列。人IL.17与小鼠IL.17在氨基酸残基序列上有
7
62.5%的相似性,与大鼠IL.17有58%的相似性。国内外的实验证实,IL.1
sclerosis,MS)
在多种神经系统疾病中都有高表达。多发性硬化(multiple
患者体内IL.17表达水平增高,并且与疾病的严重程度有_定联系。IL.17A
是IL.17家族中最主要的成员,参与免疫介导的炎症损伤,在全身炎症反应
中发挥重要作用。如果能够制备出针对IL.17A的特异性抗体,并且在实验
中证实此特异性抗体可以表现出突出的治疗效果,那么不但对于临床治疗多
发性硬化提供一个新的治疗方向,更可能实现其在神经系统疾病中的广泛应
用。
方法
lL.1
7A的引物,从提取的小鼠基因组中,利用PCR方法采用高保真DNA聚
1
合酶使小鼠IL.17A基因片段大量复制扩增,片段长度为63
bp,扩增片段为
平滑末端,再与脱氧三磷酸腺苷相连接,将连接后的基因片段再与T克隆载
重组质粒,利用重组质粒对大肠埃希氏菌DH5a感受态细胞进行转化,并对
经氨苄青霉素和指示培养基上蓝白斑筛选的阳性重组质粒分别进行PCR检
测、双酶切检测和测序检测。双酶切检
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