密码子优化的PRRSV GP5蛋白基因DNA疫苗在鼠体内免疫效力评价研究.pdfVIP

参考文献 [1]徐为燕主编．兽医病毒学．北京：农业出版社，1993 [2]姚龙涛主编．猪病毒病．上海：上海科学技术出版社，2000 [3]沈强，卫秀余，金爱华等．PRRS弱毒疫苗的安全及效力试验．中国兽医科技，2000，30(5)：3～5 GP5蛋白基因DNA疫苗在鼠体内 密码子优化的PRRSV 免疫效力评价。 侯艳红1，2“ 周艳君1 闫丽萍1 田志军1 杨汉春? 童光志1’2’” (1．中国农科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001； 2．中国农业大学 农业部预防兽医学重点实验室 北京 100094) 摘要：免疫原基因的密码子优化是提高DNA疫苗免疫保护效果的有效策略之一，编码氨基酸密码子的摇摆性导致 不同物种的细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性。哺乳动物细胞在蛋白翻译过程中与病毒蛋白氨基酸密码子 GP5蛋白基因DNA疫苗的免疫效应，本研究通过人工合成的方 使用频率存在着明显差异，因此，为了提高表达含有PRRSV 法将GP5蛋白基因的密码子改造为猪体嗜好的密码子，并将其作为免疫原基因，连同野生型GP5蛋白基因，分别插入带有 以100／．tg／只剂量，进行肌肉多点注射，共免疫3次，每次J-,-1隔2周，分别采用间接免疫荧光技术、流式细胞技术、脾淋巴细胞 DNA疫 基因其蛋白在小鼠体内得到了较高水平的表达，并诱导了较强的免疫应答，这为进一步研究和设计有效的PRRSV 苗提供了新的思路。 关键词：PRRSV；GP5蛋白基因；密码子优化；I)NA疫苗；体液免疫；细胞免疫。 and 猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductiverespiratorysyndrome，Pm诲)是由猪繁殖与呼吸综合征病 毒(P删)引起的猪病毒性疾病，以感染母猪出现流产、产死胎、木乃伊胎、产弱仔以及各种年龄猪的呼吸 系统疾病为特征，是目前危害我国乃至世界养猪业的重要疾病之一。免疫接种是预防和控制该病的主要 措施，但现有的PRRS商品化的常规疫苗包括灭活苗及弱毒苗，因其免疫效果的不确定性以及存在毒力返 ·基金项目：国家重点基础研究发展规划项目(973)(2005Ca523200)及国家自然科学基金资助。 ··作者简介：侯艳红，女，河北乐亭人，博士研究生，主要从事动物分子病毒学研究工作。 ·¨通讯作者：E—mail：gztong@hwi．卸．Gillo 812 2006学术年会 强的不安全性，给PRRS的免疫防制带来了一定困难…。人们期望有更加安全有效的新型疫苗用于该病 的预防接种。DNA疫苗由于其抗原基因在体内的表达及诱导免疫的过程与病原的自然感染相似，能够诱 导机体产生抗体和特异性CTL反应，并且具有高度的安全稳定性，所以一直受到研究者的关注。 而是设计PRRS疫苗的首选目标基因[2]。蛋白的表达水平与其引起的免疫反应直接相关，而编码氨基酸 密码子的摇摆性导致了不同物种的细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性。哺乳动物细胞在 蛋白翻译过程中与病毒蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异。很多文献也报道了基因改造成功 的例子。因此，为了提高含有GP5蛋白基因DNA疫苗的免疫效力，本研究通过人工合成的方法将GP5蛋 白基因的密码子改造为猪体嗜好的密码子，并将其作为免疫原基因，连同野生型GP5蛋白基因，分别构建 基因免疫质粒，并在小鼠体内进行了免疫试验，以期观察这种改造能否提高GP5蛋白的表达并引发更有 效的免疫应答，为进一步研究和开发DNA疫苗奠定工作基础。 1材料与方法 1．1 及Neo等选择标志的质粒pIRESlneo、Mare一145细胞以及293T细胞均由本实验室保存。 ’ 隆抗体为BioLegend公司产品。 1．3 动物6～8周龄雌性BALB／c小鼠30只，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心提 供。 。 1．4 GP5蛋白基因的密码子优化在保持GP5蛋白基因全部氨基酸不变的原则下，将其密码子改