徒手克隆工具自制及改进.pdfVIP

中国畜牧兽医 2011年第38卷第5期 经验交流 ·237· 徒手克隆工具自制及改进 黄章虎，任艳萍，谭世俭 (广西大学动物繁殖研究所．广西南宁 530004) somaticcell 摘要：徒手克隆技术(handmade 手克隆刀的自制，不但进一步节省了成本，且更能符合使用者的习惯，提高总的切割效率。试验结果表明，利用自制克隆刀进 行半卵法去核，可以达到每小时切割496枚卵母细胞的切割速度和88．14％的存活率；自制聚集针具有制作简单，可以打磨、 效果好等特点，可以进一步简化和降低徒手克隆技术的成本，提高克隆效率。 关键词：徒手克隆；自制克隆刀；自制聚集针；徒手切割方法 中图分类号：Q785 文献标识码：A 文章编号：1671—7236(2011)05一0237一04 1997年，《Nature》杂志报道了英国罗斯林研究 所Wilmut等利用绵羊乳腺细胞进行核移植试验，技术成熟、可靠的克隆技术。简而言之，徒手克隆技 成功地获得世界上第一只体细胞克隆绵羊——多利 术约分为如下几个步骤：去透明带、随机切割、染色 (Dolly)，这一成果具有里程牌的意义。到目前为去核、双半卵细胞和供核细胞的融合及激活，最后采 止，体细胞克隆技术相继在多种动物上获得成功(安 用微穴法进行重构胚的培养(谭世俭等，2003b)。 晓荣等，2002；谭世俭，2003；龚国春等，2004)，具有卵母细胞去核用的克隆刀和制作微穴培养盘用的聚 巨大的应用潜力和社会效益。成熟卵母细胞去核是 集针是开展HMC所必备的器械，商用克隆刀及聚 核移植技术中的一个重要环节。目前主要采用显微 集针具有价格昂贵、适应性有限等缺点，通过自制克 操作法去核，但这需要价格较为昂贵的显微操作仪 隆刀和聚集针可解决上述问题，且更能符合使用者 等和熟练的技术人员，限制了核移植技术的简化及 的习惯，提高总的切割效率。 应用(Bronson等，1970；Modlinski等，1970；Troun—l材料与方法 son等，1974；Trounson等，2001)。因此，研究成本1．I制作工具及材料 低廉、技术简单的核移植技术成为体细胞核移植技 1．1．1制作工具小号尖嘴老虎钳、磨石、5000目 术实际应用的关键问题之一。 抛光纸、眼科剪、小刀、502胶水。 传统的核移植是在卵母细胞有透明带的保护条 1．1．2制作材料优质剃须刀片、圆形小竹棍或类 件下进行，研究结果表明，透明带并非胚胎发育所必 似物、渔网针或大号缝纫针、自制的圆头把手。 somat— 需。去透明带的徒手体细胞克隆(handmade 1．2 自制克隆刀的制作过程 制作过程简述如下： iccell cloning，HMC)最早是Peura等(1998)进行 ①在剃须刀片上画出刀胚，刀角为45。，刀宽为3 牛胚胎细胞克隆时建立的，Vajta等(2001)进一步 mm(图1)；②用尖嘴老虎钳沿着所画刀胚将刀片断 发展了此方法。与此同时，单个胚胎培养系统获得 出(图2)；③用眼科剪将扭曲的尖刃部分快速剪除 ofthe 发展，如Vajta(2000)等发明的微穴法(well (图3)；④用磨石将各个断口打磨平整(图4)，同时 well，WOW)及Thouas等(2003)的G0(the glass对扭曲刀刃修正；⑤用抛光纸将刀片通体抛光(图 oviduct system)法，其中WOW系统可使培养的重