试验9鸡血细胞的融合试验.PPTVIP

[目的要求] 1.掌握细胞融合的概念及基本原理。 2.初步掌握PEG诱导细胞融合技术。 3.了解细胞融合技术的生物学和医学意义。 [实验原理] 本实验材料为鸡红细胞，其核结构紧密，易于观察。 [实验用品] 1. 器具：普通光学显微镜、普通离心机、恒温水浴箱、10 ml刻度离心管、试管架、吸管、注射器、载玻片等。 2. 材料：新鲜鸡血或与Alsever液混合的备用鸡血。 3. 试剂：50％PEG（现用现配），Alsever液，0.85％生理盐水，GKN液，Janus green染液或Giemsa染液。 [实验步骤] 1.鸡血的采集与抗凝 将新鲜鸡血与Alsever液按1∶4混成悬液 （抗凝效果最佳），或存放 4℃冰箱保存备用 （3～4天内可用）。 2. 50％PEG溶液的配制 称取适量PEG (Mr 4000) 放入烧杯中，将其加热熔化，待冷却至50℃，加入等体积的已预热至50℃的GKN液并充分混匀，37℃保温备用。PEG溶液需使用前现配。 [作业] 绘制显示所观察到的细胞融合情况图。 [思考题] * * 鸡血细胞的融合实验 PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子 量的多聚体。PEG可与水分子借氢键结合,在高浓度 (50％)的PEG溶液中自由水消失，导致细胞脱水而发 生质膜结构的变化，引起细胞融