磁分离酶联免疫激素定量分析系统检测生殖内分泌六项激素.docVIP

精品论文 参考文献 磁分离酶联免疫激素定量分析系统检测生殖内分泌六项激素 康 丽 （黑龙江省鹤岗矿业集团公司总医院职业病防治所 154100） 【中图分类号】R446.1 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)24-0190-02 【摘要】 目的 了解SEROZYME-I型磁分离酶联免疫内分泌定量测定仪检测生殖内分泌激素FSH、LH、T、P、E2、PRL的性能。方法 使用SEROZYME-Ⅰ型磁分离酶联免疫内分泌定量测定仪及其配套试剂对FSH、 LH、T、P、E2、PRL检测结果的线性、精度、互染率、可比性、抗干扰能力进行评价。结果 SEROZYME-I型磁分离酶联免疫内分泌定量测定系统及其配套试剂对FSH、LH、T、P、E2、PRL检测结果的线性良好；总重复性CVlt;6％，批内变异CVlt;4％，批问变异CVlt;12％，互染率lt;3％；与RIA法同时检测20份标本，其结果经统计学分析，两者相关性良好。结论 磁分离酶联免疫激素定量分析系统检测生殖内分泌六项激素重复性好，灵敏度高，快速简便，无放射性污染，有推广应用价值。 【关键词】 酶联免疫测定 磁分离 酶标记技术 激素 磁分离酶联免疫技术是瑞士Serono诊断中心发明的一种非同位素免疫检测的先进技术，称为磁性抗体免疫技术(MAIA)。使双抗体夹心酶联免疫技术在游离型标记抗体和标记抗原．抗体复合物分离中具有分离完全和快速的优点，也为磁性分离技术的推广创造了条件。我们使用该中心发明的SEROZYME-Ⅰ型磁分离酶联免疫内分泌定量测定系统及其配套试剂对 TSH、LH、T、P、E2、PRL进行了检测，现将检测结果报告如下。 1 实验原理 待测物(FSH、LH、T、P、E2、PRL)同分别用碱性磷酸酶(ALP)和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的单克隆抗体反应形成酶标抗体-抗原-FITC标记抗体的复合物，即双抗体夹心。再加入磁分离剂(含有与FITC结合的磁性微粒)，使复合物与磁性微粒结合，在永久磁体吸引下使其沉淀到管底，分离出游离酶标抗体，加入底物单磷酸酚酞(PMP)，ALP催化PMP水解释放出酚酞，在pH值为10.5的缓冲液中呈桃红色，再以永久磁体吸引磁性复合物使其沉淀，上清液置于 SEROZYME-Ⅰ型磁分离酶联免疫内分泌定量测定系统进行测定。 2 材料与方法 (1)仪器。SEROZYME-Ⅰ型磁分离酶联免疫内分泌定量测定系统(492nm、550nm、630nm三波长同时检测，程序编辑，曲线绘制，微机控制，打印输出)，磁分离器和混匀器。 (2)试剂。采用FSH、LH、T、P、E2、PRL试剂盒(由北京倍爱康生物技术有限公司提供)。 (3)检测标本。临床病人标本，空腹采血。 (4)检测方法。严格按照试剂盒说明书所介绍的方法进行操作。 先绘制标准曲线，复管测定，在SEROZYME-Ⅰ型磁分离酶联免疫内分泌定量测定系统上以FSH、LH、T、P、E2、PRL定量程序测定，自动绘制标准曲线，并将数据贮存人相应的定量程序。然后以同样的方法检测待检标本，将各管用仪器直接测定读数。 3 结果 3.1标准曲线(线性范围) 各标准液浓度相对应的吸光度均值在仪器经对数处理后，线性良好。FSH在0～150mIU/ml，LH在0～200mIU/mL，T在0.5～55nmol/L，P在0～120nmol/L，E2在0～11nmol/L，PRL在0～250ng/mL范围内与吸光度成线性关系。 3.2显色稳定性 空白对照(基质液+终止液)和测定管(酶标抗体+基质液+终止液)在不同时间(即10min、20min、30min、60min、120min时)观察其吸光度变化，入为550nm，结果见表1。 3.3总重复性 取10份静脉血，每份重复测3次，计算其总重复性。结果见表2。 3.4批内变异 同时将三份标本分别进行LH、FSH的批内检测，n=10，结果见表3、表4。 3.5批间变异 同时将3份标本分别进行LH、FSH的批间检测，n=5，结果见表5、表6。 3.6互染率 取一份高值标本，重复测3次，立即测1份低值标本，重复测3次，按(低1-低3)／(高3-低3)times;100％，计算互染率。结果为：FSH 1.35％，LH 1.26％，T 0.84％，P 2.06％，E21.95％，PRL 2.33％。 3．7对比实验 取临床病人标本20份，分别用磁分离酶联免疫法和放射免疫法同时检测FSH和LH的含量．并将测定结果进行统计学分析，见表7。两者相关性良好。 3.8抗干扰能力 取1份病人静脉血，分别注入两只试管，使其溶血和不溶血，同时检测FSH、LH、T、P、E2、PRL。结果表明，溶血对检测值有较大影响，C