DON毒素致培养的Vero细胞与鸡胚组织损伤的病理特征研讨.pdf

哈尔滨医科大学硕士论文 中英文专业词汇 脱氧雪腐镰刀菌烯醇Deoxynivalenol 致呕毒素 Vomitoxinorvomitingtoxin DNA损伤与修复 DNAdamageandrepair 彗星实验 Cometassay 单细胞凝胶电泳 Singlecellgelelectrophoresis 彗星图像分析系统 Kometimageanalysissystem DNA单链断裂 DNAsingle-strandbreaks DNA双链断裂 DNAdouble-strandbreaks 毒作用 Toxiceffect 细胞培养 Cellculture 电镜 Electronmicroscope 2 哈尔滨医科大学硕士论文 中文摘要 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)是一种单端 抱霉烯族真菌毒素，在 自然界中广泛存在并大量污染粮食，人 畜误食可引起急性中毒，对多脏器造成损害。近年研究发现， DON毒素可能与IgA肾病、人类食管癌、胃癌、骨关节疾病 发病有关，越来越受到关注。目前研究工作主要集中在污染状 况的流行病学调查和通过动物实验研究DON的急、慢性毒性 等，而利用彗星实验技术观察它对离体细胞DNA损伤与修复 的遗传毒理学未见报道。许多疾病的发生是从DNA损伤开始 的，而DNA损伤与修复的特征，对于鉴别危险暴露因素的性 质有着重要的参考价值。同时为进一步探讨DNA损伤与修复 机制提供依据。 实验结果如下: 1.细胞生长抑制试验(MTT实验):测得DON毒素对Vero 细胞的半数细胞抑制剂量 (ID50)是4.9911g/ml。为离体细胞 DNA损伤与修复实验的适宜染毒剂量作参考值。 2.DNA损伤实验:随染毒剂量增加，染毒时间延长，受 损伤细胞的数量逐渐增加，细胞DNA损伤程度逐渐加重;短 时间染毒 (4小时)，损伤以DNA碎片的数量增加为主，较长 时间染毒 (16小时)，损伤以DNA碎片变小为主。 3.DNA修复实验:去除10uMDON毒素后重新孵育若 干时间，随修复时间延长，受损伤细胞数量逐渐渐少，细胞 DNA损伤程度逐渐减轻，提示受损细胞在进行 自我修复;短 时间染毒 (4小时)修复启动时间较短 (15分钟)，而长时间 染毒(16小时)修复启动时间也相应延长((15分钟);孵育120 分钟后，修复完成。利用 “彗星图像分析系统软件 (KIAS) 获得的彗星细胞参数中，反映DNA损伤程度的综合指标一尾 动量，稳定性较好;而彗星细胞尾长似乎不适合作为观察损伤 修复的指标口 4.DON毒素致Vero细胞损伤的超微结构改变:4h染毒 哈尔滨医科大学硕士论文 组细胞核体积变小，微绒毛脱落，部分质膜伸出叶片状伪足， 胞质内游离核蛋白体减少，部分线粒体峭膜融合，形成高电子 密度凝集块，质膜下饮泡和胞内空泡出现;16h染毒组细胞核 体积变大，核型不整，染色质形成斑块状散布于核内，细胞表 面质膜形成叶片状结构并且部分脱落，线粒体靖融合浓缩成高 电子密度斑块，双层核膜结构不清，高尔基器扁平囊紧缩，大 小泡消失。 5.DON毒素致鸡胚主要脏器病理损伤的光镜观察:鸡胚 的关节软骨、肝脏、’肾脏呈不同程度病变，软骨细胞、肝细胞、 肾小管上皮细胞均表现为变性、坏死。 关键词 :脱氧雪腐镰刀菌烯醇;Vero细胞;DNA损伤与修复; 鸡胚 :病理形态 哈尔滨医科大学硕士论文 ABSTRACT Deoxynivalen