CGRP和NGF对全脑缺血再灌注大鼠脑组织Erk表达的调节作用研究.pdfVIP

医学医药 CGRP和NGF对全脑缺血再灌注 大鼠脑组织Erk表达的调节作用 邢雪松李捷方秀斌 (沈阳医学院解剖学教研室，中国医科大学基础医学院神经生物学教研室) 摘要：目的检测大鼠脑缺血再灌注后细胞外调节蛋白激酶(雎)的表达，探讨降钙素基因相关肽 (c研咿)和神经生长因子(NGF)对脑组织的保护作用及机制。方法采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺血再 灌注模型，采用免疫组织化学蛾法及星微图像分析检测海马及皮质内Erl(的表达。结果大鼠缺血再灌注海 对缺血神经元有协同修复作用。 关键词：降钙素基因相关肽神经生长因子细胞外调节蛋白激酶海马脑缺血再灌注大鼠 脑缺血导致神经元坏死变性、迟发性神经元死亡和，或凋亡，其机制十分复杂，至今尚不完全清楚。 降钙素基因相关肽(caJcitor曲gene—relaled 在于神经组织，具有改善脑血流及神经保护作用L1】。神经生长因子(nerve 系统中最重要的生物活性物质，它不仅参与受损神经元的修复，还可增强CGRP的表达，刺激CGRP的合 成【2’3J。近年来，许多研究表明，细胞内信号传导酶类中有一些对缺血再灌注损伤的神经元具有保护作用． 如丝裂原活化蛋白激酶(旆【ogen—activated pin．in 酶(e)(hweuularsignalregulated 血再灌注的保护作用及其机制。 1．材料和方法 NGF组。 1．2全脑缺血再灌注模型的制备应用颈动脉负压分流法制备大鼠全脑缺血再灌注模型：①UR组：实 侧颈总动脉，从右颈外动脉持续抽吸颈总动脉内血液(O．3ⅡtI／lIlin)，此为脑缺血开始；同时，自左股静脉 持续回输血液，全脑缺血20m抽后停止抽血，向颈动脉内注入lIIll生理盐水，结扎颈外动脉，松开两侧颈 总动脉，此为再灌注开始。②CGRP组：全脑缺血过程同上。于再灌注开始时，经右颈外动脉注入cGRP 注射完，其余步骤同cGF【P和NGF组。⑤s11锄组：麻醉和手术步骤同①，不夹闭左右颈总动脉，不回 抽血液，不注射药物。以上各组动物均于再灌注24h后处死取材。用4％多聚甲醛灌注，常规石蜡包埋。 1，3免疫组织化学染色将石蜡包埋的脑行冠状切片，片厚7脚。常规HE染色，光镜下观察假手术组 鼠，Santa 141 医学医药 多，可一直持续到再灌注28d。研究表明，脑缺血可以激活一些在细胞凋亡过程中起协助作用的基因及其 表达产物，通过对促细胞凋亡基因和抑细胞凋亡基因的调控发挥着重要的作用[8】。Erk作为MAPKs家族成 员之一，属于丝，苏氨酸蛋白激酶，激活后通过信号传导，活化细胞核内不同的转录调节因子，进而使细 胞出现增殖、分化或凋亡。本实验中，脑缺血再灌注2d-h后，缺血组较假手术组Erk表达明显增多，可能 为缺血刺激引起的胶质细胞释放生长因子所致。缺血再灌注时Erk活性的增加可能是细胞针对缺氧刺激启 动修复过程、促进细胞存活的保护性机制，对于经历了缺血再灌注损伤的神经元具有保护作用。此外，本 实验表明，皮质E^的表达高于海马CAl区，可能与海马易损性有关。 过程，促进细胞存活。本实验中，CGRP可增加缺血再灌注脑组织皮质及海马Erk蛋白的表达，表明CGRP 对缺血神经元具有保护作用。 再灌注脑组织皮质及海马Erk蛋白的表达，表明其对缺血神经元同样具有保护作用。由于CGRP与NGF有 一些相同的作用环节，二者发挥生物学活性均依赖Erk作为第二信使。联合应用将加强各自的作用u¨。本 缺盘神经元有协同修复作用。 (4)脑缺血再灌注损伤动物模型的复制多采用阻断脑血管然后再灌注血流的方法。目前较常采用的方 法有两动脉阻断加低血压法、三动脉阻断法、四动脉阻断法、颈动脉分流法。这几种方法在不同程度上存 在着存活率和成功率低、手术操作复杂及改变了解剖学结构和血液动力学状态等缺陷n2’1引。颈动脉负压分 流法显著特点是不改变脑血管的主要解剖结构；实施再灌注后，不改变血液动力学方向；回抽的血液经股 静脉回输，可维持血容量及血压，保证其他器官的血液供应；手术操作简便、成功率高、重复性好、再灌