人教版选修1 血红蛋白的提取和分离 学案.docVIP

课题3　血红蛋白的提取和分离 1．尝试对血液中血红蛋白的提取和分离。 2．体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法。 3．了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的原理。 蛋白质的各种特性的差异如分子的______和______、所带________________、溶解度、________和对其他分子的亲和力，等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 一、凝胶色谱法 1．概念：凝胶色谱法也称做__________，是根据____________的大小分离蛋白质的有效方法。 2．原理：大多数凝胶是由________化合物构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量____的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程______，移动速度______；而相对分子质量______的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在________移动，路程______，移动速度______。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 3．凝胶材料：______性，______类化合物，如葡聚糖或________。 4．具体过程： （1）________混合物上柱。（2）洗脱开始，______________的蛋白质______进入凝胶颗粒内；相对分子质量______的蛋白质则被排阻于凝胶颗粒之外。（3）________________的蛋白质被滞留；__________________的蛋白质向下移动。（4）相对分子质量不同的分子完全分开。（5）____________的蛋白质行程较短，已从________中洗脱出来，________________的蛋白质还在行进中。 提示：洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。 二、缓冲溶液 1．作用：在________内，能够抵制外界的________对溶液____的影响，维持____基本不变。 2．配制：通常由________溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的______就可以制得在不同________使用的缓冲液。 三、电泳 1．概念：带电粒子在______的作用下发生______的过程。 2．原理：许多重要的生物大分子，如______、______等都具有________的基团，在一定pH下，这些基团会带上______或______。在电场的作用下，这些带电分子会向着与所带电荷__________移动。电泳利用了分离样品中各种分子__________以及分子本身的______、______不同，使带电分子产生不同的________，从而实现样品中各种分子的分离。 3．分类：________凝胶电泳、__________凝胶电泳。 在测定蛋白质相对分子质量时通常使用__________________凝胶电泳。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带________的多少以及__________等因素。而在SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳中，SDS能使蛋白质发生________，由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会______成单条肽链，因此测定的结果只是________的相对分子质量。同时SDS所带的大量负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于__________。 四、蛋白质的提取和分离 蛋白质的提取和分离一般分为四步：________、粗分离、______和________。 1．样品处理及粗分离 血液由__________和__________组成，其中红细胞最多。红细胞的组成中，除水分以外，约90%是__________。血红蛋白由______条肽链组成，包括两条__________和两条__________。其中每条肽链环绕一个__________基团，此基团可携带一分子氧或一分子__________。血红蛋白因含有________而呈现____色。 （1）红细胞的洗涤 ①目的：去除________。 ②方法：采用________离心，如500 r·min－1离心2 min，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色______，将下层______的红细胞液体倒入______，再加入五倍体积的________，缓慢搅拌________，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有______，表明红细胞已洗涤干净。 （2）血红蛋白的释放 将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加________到________体积，再加40%体积的______，置于磁力搅拌器上充分搅拌10 min。在________和________的作用下，红细胞______，释放出血红蛋白。 （3）分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合液离心后可观察到试管中溶液分为4层（从上往下）： 第1层：________的甲苯层。 第2层：脂溶性物质