脐带血来源间充质干细胞体外分离培养条件的优化-生物化学与生物.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2008, 35(8): 905~913 脐带血来源间充质干细胞体外 分离培养条件的优化* 1) 1)** 1) 1) 1) 2) 秀波 刘天庆 郝永杰 刘 洋 马学虎 崔占峰 1) ( 大连理工大学精细化工国家重点实验室，干细胞与组织工程研究室，大连116023 ； 2)Department of Engineering Science, University of Oxford, Oxford OX 1 3P J, UK) 摘要 脐带血间充质干细胞(umbilical cord blood mesenchymal stem cells, UCB-MSCs)不仅可以作为滋养层细胞支持造血干细 胞在体外的大规模扩增，在造血移植过程中还能够降低并发症的发生率以及加速造血重建功能的恢复 但是，目前 UCB-MSCs 的原代分离培养成功率一般只有30%左右，为进一步提高该成功率，利用正 实验方法对UCB-MSCs 体外培养 的主要影响因素：细胞的接种密度、细胞因子的组合及用量、是否添加血清和滋养层细胞，进行逐层筛选，并对培养出的间 充质干细胞进行了流式细胞分析和向成骨、软骨及脂肪方向的诱导分化检测，以期获得UCB-MSCs 培养的最佳方法 实验 结果表明，细胞的接种密度是UCB-MSCs 培养最显著的影响因素(P 0.1)，接种密度越大，MSCs 越容易生长，能够培养出 MSCs 的几率就越大，其次为细胞因子，添加细胞因子能有效地刺激MSCs 的生长 在高接种密度的基础上，添加细胞因子 IL-3(15 g/L)和GM-CSF (5 g/L)，可 提高UCB-MSCs 体外原代培养的成功率，从30%左右提高到90% 以上 流式细胞 + + + + + 检测结果显示，所分离培养的细胞表达间充质干细胞的抗原(CD13 、CD29 、CD44 、CD 105 、CD 166 )，不表达造血细胞的 - - - 抗原(CD34 、CD45 、HLA-DR )，并能够向成骨、软骨及脂肪方向分化，这与源于骨髓的间充质干细胞相一致 所建立的培 养方法能够为UCB-MSCs 的临床应用提供 量优质的种子细胞 关键词 正交设计，脐带血，间充质干细胞，培养条件优化，细胞因子 学科分类号 Q2 脐带血(umbilical cord blood, UCB) 间充质干细 细胞低密度接种优于高密度接种，添加地塞米松也 胞(mesenchymal stem cells, MSCs) 为中胚层发育的 [7] 6 2 能够促进细胞的快速生长. Liu 等 以1伊10 cells/cm 早期细胞，具有多向分化潜能，其形态和生物学特 接种密度在含有20%FBS 的IMDM 培养基中原代 [1] 点与骨髓来源MSCs 相似 在一定条件下进行体 培养脐带血来源的间充质干细胞，在144 份脐带血 外培养和诱导分化后能向神经细胞(神经元和神经 中有108 份成功地培养出间充质干细胞，占总数的 胶质细胞) 、成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌 75% 但对于脐带血来源的MSCs 原代培养条件的 腱、肌肉和心肌细胞等方向分化，可作为细胞治疗 优化，目前还未见文献报道 如此低的成功率极 的种子细胞和基因治疗的载体细胞[2～4]