HSP70对卵巢癌细胞凋亡影响的实验研讨.pdf

HSP70对多同巢癌细胞凋亡影响的实验研究 张蕴莉许德顺 (锦州医学院附属第一医院检验中心．锦州121001) 摘要探讨HSP70对卵巢癌细胞A2780凋亡的影响．为卵巢癌生物治疗及进一步探讨 HSP70抗凋亡机制提供实验依据。将体外培养的卵巢癌细胞A2780分为热休克组 和非热休克组。热休克组的细胞经预热休克处理。两组细胞均置于不同浓度 TNF-a中。采用脱氧拔苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞 凋亡指数。热休克组与非热休克组组问比较。热休克组7胄亡率比非热休克组明显下 降，差异有显著性意义(一0．01)结论：热休克蛋白(HSP)70对卵巢癌细胞A2780 的碱亡具有抑制作用。 关键词热休克蛋白70；卵巢癌；凋亡 近年来的研究表明，肿瘤细胞特别是恶性肿瘤细胞常常高表达HSP70f“。经热休克处理 的肿瘤细胞能提高其存活率及增强抵抗凋亡的能力，这种抵抗力发展的动力学与热休克蛋白 HSP70抗凋亡机制提供实验依据。 1材料与方法 1．1材料 倒置显微镜OLMPUS BH- 司；RPMll640(美国产品)。TUNEL试剂盒购自德国宝灵曼公司。 1．2方法 1．2．1细胞培养 实验所采用的卵巢癌细胞株A2780购自中国医学科学院肿瘤研究所。卵巢癌细胞 培养24h。 1．2．2实验分组 将生长良好的贴壁肿瘤细胞。随机分为热休克组和非热休克组。每组又分为对照组、 180 TNF-a 4个组。热休克组：对照组细胞放于42℃ 25ng／m1．TNF_a50ng／ml，TNF_a100ng／ml 水浴lh。3712恢复2ho实验组：在热休克处理后，加入不同浓度TNF．q 25，50，100ng／ml，继续 培养24h。每组三个复孔。 1．2．3检测细胞凋亡指数 按TUNEL试剂盒说明书进行操作。 1．2．4数据处理 计数1000个细胞中凋亡细胞百分数为凋亡细胞指数。数据输入WindowofSPSS10．0 统计软件包进行t检验。 2结果 2．1 TNF-et诱导卵巢癌细胞A2780凋亡 0．01) 2．2HSPT0对TNF．旺诱导凋亡的抑制作用 在热休克条件下(42℃)1h，同样加入TNFm25～100ng／ml作用，凋亡率明显下降。当 意义。结果如表1。 衰1 HSPT0对卵巢癌细胞A7,780凋亡的影响 组 别 TNF-a旅度／(g，-IlI) 非热休克组Ap0／％ 热休克组APt)／％ 对照组 0．7士2．5， 2．2士1．23 Tl 25 790±3．60。‘ 3．2±I．87 n 50 8．4±3．57。’ 52±2．30’。 T3 1∞ 15．8±6．11’‘ 74±453。。 。P0．05；-·声O．01 3讨论 热休克蛋白(HSP)是机体遇到应激反应时合成的一种特异和高度保守的蛋白质家族。其 中HSP70被认为是保护哺乳类动物免受损害的最重要的应急蛋白质。细胞凋亡是机体组织 自稳机制相关的主动性死亡．其与HSP70之间的相互作用必然会影响到机体组织细胞的生命 状态，而HSP70对肿瘤细胞凋亡的作用很可能关系到患该肿瘤病人的治疗与生存。 18l A2780具有诱导凋亡作用，并