实验方案(皂化法纯化番茄红素的研究).docVIP

皂化法纯化番茄红素的研究 一．研究意义 番茄红素是番茄和番茄产品中主要的类胡萝卜素，在人体内不能自合成，只能从食物中摄取，是人类饮食中重要的化合物。番茄红素在自然界中主要存在于番茄、西瓜、柿子、南瓜、灯笼大红辣椒、葡萄柚、番石榴等食物中，其中在番茄中含量最高。番茄红素能消除过氧化自由基，具有抗衰老的作用，对预防癌症有显著效果，并具有活化免疫细胞的功能。因此番茄红素是一种很有开发前途的功能性天然色素，在食品、化妆品以及医药领域有着广泛的应用前景。目前，番茄红素的提取是国内外的一个研究热点，天然植物浸提番茄红素包括溶剂浸提法、超临界流体萃取法F、酶反应法 、皂化法等。超临界CO 萃取原料处理量小，生产成本高，难以工业化生产；酶法由于没有特别有效的酶，影响因素多，番茄红素含量低；而有机溶剂浸提是番茄红素工业化生产最常用的方法，虽然产品有溶剂残留，但经过脱溶和调配，就能获得合格产品。本文对传统的番茄红素的提取过程进行改进，使用混合溶剂作浸提剂，并在提取前使用弱碱对番茄糊进行皂化的方法提高浸提速率和浸提量，并消除β一胡萝卜素对番茄红素测定的影响，可行性强。研究了在不同的预处理、溶剂的选择、皂化工艺条件的选择、液料比、pH值等因素下的提取效果，确定了最佳的提取工艺条件，为进一步开发利用这种功能性天然色素提供了一定的参考。 二．实验材料与方法 1.材料与仪器 ⑴材料 番茄红素粗品、乙醇、正己烷、石油醚、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、氢氧化钾(上海化学试剂厂)：均为分析纯试剂。 ⑵实验仪器 数显恒温水浴锅(HH一2国华电器有限公司)；循环水多用真空泵(SHB一3郑州杜甫仪器厂)；上皿电子天平(FA1604上海精科天平)；722光栅分光光度计(上海第三仪器厂)；紫外一可见连续扫描分光光谱仪(UV一2401PC，日本岛津公司)。 2.实验方法 ⑴最佳浸提溶剂的选择：用不同的溶剂浸提番茄红素，浸提液在450～520 nm范围内用722型分光光度计测吸光度，以确定最佳浸提溶剂。 ⑵最大吸收波长的确定：用最佳浸提溶剂浸提番茄红素，浸提液在290～650 nm范围内全波长扫描，以确定最大吸收波长。 ⑶皂化工艺条件的选择：称取相同的经预处理的番茄糊2份，一份皂化，一份不皂化，测浸提液的吸光度，进行比较，并选择皂化时间和皂化温度。 ⑷最佳料液比的确定：称取相同的经预处理的番茄红素粗品4份，以不同的料液比浸提，测浸提液的吸光度，以确定最佳料液比。 ⑸浸提次数的确定：准确称取经预处理的番茄红素粗品1份，浸提4次，分别测定每次的吸光度。 ⑹最佳的工艺条件的确定：采用L9（33）正交表设计实验，以浸提时间、浸提温度、浸提pH值三因数三水平进行实验。 三．结果与讨论 1.浸提溶液的选择 称取相同质量的预处理的番茄红素粗品分别置于具有相同体积的丙酮、石油醚、正己烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮一石油醚一乙醇(1：1：1)、丙酮一石油醚一乙醇(2：1：1)、丙酮一石油醚一乙醇(1-2：1)的三角锥瓶中，在室温下密闭静置一定时间，抽滤，分液，从每份浸提液中取1 mL稀释到相同倍数，用722光栅分光光度计在450～520 nm内测吸光度，得到不同溶剂在各自最大吸收波长的吸光度。 由表1可知，丙酮一石油醚一乙醇(2：1：1)的浸提效果最好，用混合试剂比只用单一试剂的浸提效果好。因为丙酮具有一定的亲水性即极性，能和水互溶，能与番茄浆充分均匀地接触，降低水膜对番茄红素的传质阻力，同时具有较好的亲油性，因为要分离的番茄红素是脂溶性的。石油醚是弱极性成分，可以和丙酮互溶，起贮存番茄红素的作用。乙醇能溶解番茄细胞壁和细胞膜上的醇溶性物质，增加细胞壁和细胞膜的通透性，有利于溶剂的渗透。 2．最大吸收波长的确定 称取经预处理的番茄糊红素粗品，采用丙酮一石油醚一乙醇(2：1：1)为浸提液，浸提液在290～650 nm的范围内进行扫描，番茄红素的吸收光谱如图2。结果在444nm、471 nm、502 nm处各有一个吸收峰，其中以471nm处为最大吸收波长。因此在测吸光度时，吸收波长选471nm，在此处吸光系数最大，可使测定有较高的灵敏度。 3.皂化工艺条件的选择 ⑴皂化方式的选择：称取相同的经预处理的番茄红素粗品2份，1份加入KOH溶液，在60℃下皂化30min，取出冷却，洗至中性，另1份不皂化，用丙酮一石油醚一乙醇(2：1：1)为浸提液，从每份浸提液中取1 mL稀释到相同倍数，用722光栅分光光度计测其471 nm处的吸光度，结果见表2。 表2表明：皂化试样比未皂化试样的浸提效果好。通过对番茄原料的皂化，油脂和碱发生反应，生成金属皂和甘油。大部分的脂肪酸甘油酯及游离脂肪酸被除去，番茄红素被释放出来，可以提高番茄红素的浸提量。因为脂肪酸的钾盐比钠盐更容易在水中溶解，本文选择KOH作为皂化用碱，且皂化试样加入溶剂