第四节 紫外可见分光光度计课件.pptVIP

一、紫外可见分光光度计基本组成 1. 光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500 nm。 紫外区：氢、氘灯。发射150～400 nm的连续光谱。 紫外可见分光光度计—基本组成 2．单色器 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。 包括狭缝、准直镜、色散元件 紫外可见分光光度计—基本组成 紫外可见分光光度计—基本组成 3．样品室 样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。 吸收池： 玻璃——能吸收UV光，仅适用于可见光区 石英——不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致） 使用时注意保护透光面 紫外可见分光光度计—基本组成 4．检测器：利用光电效应，将光信号转变为电信号的装置 紫外可见分光光度计—基本组成 5．记录装置：讯号处理和显示系统 二、紫外可见分光光度计—常见类型 1．单光束分光光度计： 特点： 从光源到检测器只有一个光束，一束单色光，结构简单 须将空白、样品池一次推入光路→移动误差 一般不宜进行扫描测定光谱 续前 2．双光束分光光度计： 3．双波长分光光度计 特点： 有两个单色器，产生两束不同波长的光，测出两波长的吸收度 利用吸光度差值定量 消除干扰和吸收池不匹配引起的误差 可固定一波长，扫描一波长，测绘A差值光谱 可固定两束单色光的波长差扫描，测得一阶导数光谱 第五节 分析方法 一、定性分析 二．结构分析 三、定量分析 一、定性分析 （一）定性鉴别 定性鉴别的依据→吸收光谱的特征 吸收光谱的形状 吸收峰的数目 吸收峰的位置（波长） 吸收峰的强度(ε、 ) 相应的吸光系数(ε、 ) 续前 1．比较吸收光谱的一致性 同一测定条件下， 与标准对照物谱图或标准 谱图进行对照比较 2．比较吸收光谱的特征数值 3．比较吸光度或吸光系数的比值： 例3 p34 二．结构分析 （一）分析紫外吸收光谱的的几个经验规则 从吸收光谱中初步推断官能团 如果在200-700nm区间无吸收峰，该化合物无共轭双键系统，该化合物为脂肪烃、脂环烃或他们的简单衍生物（氯化物，醇，醚，羧酸类等），也可能是非共轭烯烃。 在220-250nm范围有强吸收带（K带），表示有α，β不饱和醛酮或共轭烯烃结构存在。 在200-250nm范围有强吸收带（E带），结合250～290nm的中强吸收带（B带），说明该化合物具有芳香结构苯基。 4.如果在250-350nm弱的吸收带（ε=10-100，R带），说明分子结构中含有醛、酮羰基或共轭羰基。 5.300nm以上的强吸收带，则该化合物结构中可能具有两个以上的较大共轭体系。若吸收强且具有明显的精细结构，说明为稠环芳烃，稠环杂芳烃或其衍生物。 光谱解析注意事项 （二)判断顺反异构 （三）判断互变异构体 （四）判断同分异构体 三、 纯度检查 利用待测物与杂质在紫外可见光区吸光度的差异，选用适当的波长可以对待测物的纯度进行检查。 检查肾上腺素中肾上腺酮时。 四、定量分析 （一）单组分分析 1．标准曲线法 2．标准对照法 3．吸光系数法 续前 1．标准曲线法 芦丁含量测定 2．对照法：外标一点法 注：当样品溶液与标准品溶液的稀释倍数相同时 3. 吸收系数法 例4：维生素B12 的水溶液在361nm处的百分吸光系数为207，用1cm比色池测得某维生素B12溶液的吸光度是0.414，求该溶液的浓度 解： 例5：精密称取B12样品25.0mg，用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm处测定吸光度为0.507，求B12的百分含量？ 解： （二）多组分分析 三种情况： 1．两组分吸收光谱不重叠（互不干扰） 两组分在各自λmax下不重叠→分别按单组分定量 续前 2．两组分吸收光谱部分重叠 λ1→测A1→b组分不干扰→可按单组分定量测Ca λ2→测A2→a组分干扰→不能按单组分定量测Ca 续前 3．两组分吸收光谱完全重叠 ——混合样品测定 （1）解线性方程组法 （2）等吸收双波长消去法 （3）系数倍率法 1．解线性方程组法 步骤： 2．等吸收双波长法 步骤： 消除a的影响测b 续前 消去b的影响测a 注：须满足两个基本条件 选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点 选定的两个波长下待测物的吸光度差值应足够大 3．系数倍率法 前提：干扰组分b不成峰形 无等吸收点 续前 步骤：b曲线上任找一点→λ1 另一点→λ2 优点：