生化与分子生物教学（谢剑君）第07章 酶与催化反应（卢涛）.pptVIP

Fe-S 细胞色素cytochrome,Cyt A、结构：一类含铁卟啉辅基的色素蛋白 B、分类: Cyta: Cytaa3 Cytb: Cytb562 、Cytb566、 Cytb560 Cytc: Cytc 、 c1 C、区别： ① 铁卟啉辅基侧链不同 铁卟啉辅基与酶蛋白 连接方式不同 三、酶工程是对酶进行改造的新型应用技术 酶工程（enzyme engineering）是利用化学的和基因工程方法对酶的结构、理化性质进行改造，或研发新的酶分子，使之具有更高的催化效率、高度稳定性，更容易提取与纯化，便于工业、农业和医药卫生等领域应用的一门技术。 酶工程方法 化学工程 通过基因重组技术对酶进行修饰、改造或再设计 （一）有些酶可通过化学工程手段进行改造 1．固定化酶是固相酶 固定化酶（immobilized enzyme）是将水溶性酶用物理或化学方法处理，将其固定于有机或无机物的介质上，或包埋于某种膜中，使之成为不溶于水的、稳定的、可以反复使用的固态酶。 固定化酶可以装柱，这样，固定化酶不但具有酶的高催化效率和高特异性，而且还具有类似离子交换层析和亲和层析的优点，反应自动化、连续化、管道化。 2．抗体酶是具有酶活性的抗体 抗体酶（abzyme）是人工制造的具有催化活性的单克隆抗体。 根据酶底物的过渡态与酶的活性中心密切结合并易于生成产物的特性，设计出过渡态分子的类似物，并以此作为抗原，接种于动物体内使之产生相应的抗体。该抗体既然能与过渡态类似物相互适应并结合，也就有可能具有催化过渡态反应的酶活性。这种具有酶活性的抗体，称为抗体酶或催化性抗体（catalytic antibody）。 3．对酶活性中心必需基团的化学修饰可改变酶的催化性质 通过对酶活性中心的某一必需基团的化学修饰，改变酶的催化性质。这种酶即保持酶蛋白的理化性质和稳定性，又可使其具有人们预想的催化目的。 4．模拟酶是人工合成的具有催化作用的非蛋白质有机化合物 利用有机合成的方法合成的具有底物结合部位和催化部位的非蛋白质有机化合物称为模拟酶（mimic enzyme）。 模拟酶具有天然酶的高效、特异催化作用。由于模拟酶是小分子的稳定的化合物，应用方便。同时，模拟酶还克服了天然酶提取纯化的复杂性、耗材多、产量低、酶的不稳定性、生物大分子在应用上的抗原性等许多不便。 （二）基因工程是对酶一级结构的修饰 酶的基因工程是利用重组DNA技术对酶一级结构的修饰，以发现催化活性更高、更稳定的可以大量生产的酶。 酶的基因工程方法 理论性再设计（rational redesign） 直接演化（directed evolution） 在准确了解和掌握酶的结构、功能和催化机制的基础上，采用定点突变改变酶蛋白的氨基酸序列。 一、调节酶的活性可受别构效应剂的调节 （一）别构效应剂与别构酶结合引发酶的构象改变 别构调节 (allosteric regulation) 一些代谢物可与某些酶分子活性中心外的某部分可逆地结合，使酶构象改变，从而改变酶的催化活性，此种调节方式称别构调节。 别构酶（allosteric enzyme）：能发生别构效应的酶 别构效应剂（allosteric effector）： 能引起酶发生构象改变的化合物 调节部位（regulatory site）： 别构效应剂与酶结合的部位 别构酶也有两种构象形式，紧缩态(tense state, T state)和松弛态(relaxed state, R state)。T态和R态对底物的亲和力或催化活性不同，别构效应剂就是通过引起酶R态与T态的互变，改变酶的催化速率。 （二）别构效应剂可引起别构酶分子中各亚基间的协同作用 亚基的构象改变可以相互影响，发生协同效应。（cooperativity） 正协同效应（positive cooperativity） 后续亚基的构象改变增加其对别构效应剂的亲和力，使效应剂与酶的结合越来越容易。 负协同效应（negative cooperativity） 后续亚基的构象改变降低酶对别构效应剂的亲和力，使效应剂与酶的结合越来越难。 同种协同效应（homotropic cooperativity） 别构效应剂引起的构象改变增加或降低后续亚基对同种别构效应剂的亲和力。 异种协同效应（heterotropic cooperativity） 别构效应剂引起的构象改变增加或降低后续亚基对他种别构效应剂的亲和力。 别构效应剂引起的构象改变增加酶对底物的亲和力，这种现象（属于异种正协同效应）称为别构激活作用（allosteric activation）。此别构效应剂称为别构激活剂（allosteric