血型鉴定及血细胞标本制备与观察精选.pdf

血型鉴定及血细胞标本制备与观察 上课地点：化学楼 120 任课教师：陈丽杰 办公地点：生化楼 215 电话 课程要求： 预习实验内容，掌握实验目的及原理、仪器和试剂、实验步骤； 完成预习报告（实验名称、实验目的、实验原理、实验器材与试剂、实验方 法与步骤） 实验注意事项： 1 、实验台上物品按实验室管理老师要求摆放整齐； 2 、实验废物按实验室管理老师要求收集； 3、实验结束后，经老师检查后方可离开。 实验纪律： 1 、按时上课 2 、穿实验服（白大衣） 3 、不许吃东西，课堂严禁大声喧哗 4 、手机静音 实验成绩： 预习报告： 20 分 实验操作： 40 分 报告内容：结果和讨论 40 分 血型鉴定及血细胞标本制备与观察 （指导教师：陈丽杰） 一、实验目的：  掌握人体血型（ABO 型）的鉴定方法和原理，观察红细胞凝集现象，同时 了解自己的血型；  掌握血涂片的制备方法；认识红细胞及各种白细胞的典型形态；  学习巩固显微镜的使用方法。 二、实验原理：  红细胞膜上具有血型糖蛋白，作为抗原，也称为凝集原；ABO 血型就是根 据红细胞表面抗原来确定的，根据红细胞上有或无 A 抗原或/和 B 抗原，将 血型分为 A 型、B 型、AB 型及 O 型四种。  血清中含有相应的特异性抗体称为凝集素。  凝集原和相应的凝集素特异性结合，使红细胞凝集成团，进而引起红细胞破 裂，产生溶血。  ABO 血型鉴定的原理是利用红细胞凝集试验，将待测血液分别与已知含 A 抗体和 B 抗体的标准血清混合，观察是否发生凝集现象，判断待测血液红细 胞上有何种抗原，由此确定待测血液的血型。 三、实验器材与试剂 （1 ）仪器与材料：  普通光学显微镜，采血笔，刺血针、载玻片，盖玻片，滤纸，擦镜纸，无菌 棉签，消毒牙签，培养皿等；  受检者血液；  生物标本永久制片。 （2 ）试剂和药品：  瑞氏-姬姆萨 A 液（主要成份：瑞氏染料，姬姆萨染料）；  瑞氏-姬姆萨 B 液（主要成份：磷酸盐）；  抗 A 血型定型试剂，抗 B 血型定型试剂;  碘伏  香柏油，乙醚，乙醇 四、实验步骤与操作方法 （1 ）ABO 血型鉴定 ① 取一块清洁载玻片，用记号笔划上记号，左上角写 A 字，右上角写 B 字。 ② 用无菌棉签蘸上碘伏，消毒无名指指端后，以消毒针刺破皮肤取血，载玻片 的每侧各放入一小滴血（指端采血点勿触及载玻片！）。 ③ 用小滴管吸抗 A 血型定型试剂一滴加入左侧，用另一小滴管吸抗 B 血型定型 试剂一滴加入右侧，并用牙签搅拌，使标准血清与血液混匀。（每边用一支牙签， 切勿混用！）。 ④ 室温下静置 10— 15min ，观察有无凝集现象。假如只是A 侧发生凝集，则血 型为 A 型；若只是 B 侧发生凝集，则血型为 B 型；若两边均未凝集，则为 O 型； 若两边均发生凝集，则为 AB 型。 用碘伏消毒左手无名指指腹 采血笔按住已消毒的指腹 采血 血滴分别滴在载玻片的两端(皮肤不可接触玻片) （2 ） 血涂片的制作  挤出第三滴血置于一干净载玻片的右侧（注意勿触及皮肤，否则血在玻片上 就不能成滴）。  以左手拿该片的两端，迅速用右手拿住另一干净载玻片，用其窄边接触样品 （血滴），使其在两载玻片接触处展成线状。以约 45°角轻推载玻片，使样 品展成一薄层血膜（图 1 ）。注意推片动作要连贯，血片的厚度依血滴大小、 推片速度和两片夹角而定。血滴小，速度慢，夹角小则血片薄。 图 1