维生素D受体基因Tru9I多态性与内蒙古地区汉族绝经后妇女骨密度的关系.docVIP

精品论文 参考文献 维生素D受体基因Tru9I多态性与内蒙古地区汉族绝经后妇女骨密度的关系 王鹏1 贾彦彬2 周立社2（1包头医学院第一附属医院检验科 014010；2包头医学院 014010） 【中图分类号】R329 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）02-0117-02 【摘要】 目的 探讨维生素D受体(VDR)基因Tru9 I多态性与内蒙古地区汉族绝经后妇女骨密度的关系。方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP),分析200名内蒙古地区汉族绝经后妇女VDR基因Tru9 I多态性,同时用双能X线骨密度仪测定绝经后妇女腰椎和髋部的BMD。统计分析VDR基因Tru9 I多态性与骨密度的关系。结果 （1）维生素D受体基因Tru9 I多态性的基因型频率为TT 47.5%，Tt 44.0%，tt 8.5%， T、t等位基因频率分别为69.5%和30.5%。（2）校正年龄、体质量指数BMI对BMD的影响后，各基因型间在腰椎L2-L4、股骨颈、wards三角区、大转子区的骨密度差异均无统计学意义。结论 内蒙古地区汉族绝经后女性VDR基因 Tru9 I多态性与骨密度没有关联。 【关键词】 维生素D受体基因 Tru9 I多态性 骨密度 维生素D（Vitamin D）是人体一种必需的维生素，人体不能自行合成，需通过日晒或食物摄入获得。维生素D本身无活性，需要在体内经过两次羟化，转化为1，25-二羟维生素D3[1，25-（OH）2D3]，1,25双羟维生素D3是维生素D最有活性的代谢物，是人体最重要的钙调节激素之一，它通过特殊的核受体蛋白-VDR介导而发挥作用，1，25-（OH）2D3调节骨的形成和再吸收[1]。因此VDR作为能影响骨代谢及骨密度的重要因素而倍受关注。骨密度作为骨质疏松性骨折的主要危险因子相对容易测量和量化，故骨密度测定被认为是骨质疏松诊断的金标准。目前有许多测定BMD的方法，其中双能 X线骨密度仪，已被国内外广泛采用[2-3]。骨密度与人的营养、运动、遗传及激素水平等多种因素有关,其中遗传是影响骨密度的主要因素。从1992年Morrison等[4]发现了VDR基因多态性与骨密度有关联后，人们对VDR基因多态性与骨密度相关性的研究逐步深入。不同的国家和地区对其研究结论不尽相同。目前，尚无关于维生素D受体基因Tru9 I多态性与内蒙古地区汉族绝经后妇女骨密度关系的研究报道。因此，本研究为了解内蒙古地区汉族绝经后妇女遗传学改变引起骨质疏松的机制和遗传因素与骨质疏松间的关系提供一定依据。 1 研究对象与方法 1.1 研究对象 收集内蒙古西部地区自然绝经汉族妇女200名，年龄55～65岁，平均年龄59.6岁且无血缘关系。受试者经流行病学调查，包括病史及进行体格检查、血尿常规、肝肾功能正常等，且排除以下几种情况：（1）有重大器质性疾病者;（2）继发性骨质疏松、糖尿病、内分泌疾病等;（3）其他骨疾病，已知或者有可疑的恶性肿瘤史者;（4）严重肝、胆、肾疾病者;（5）长期使用影响骨代谢药物如利尿、肝素、糖皮质激素等者;（6）有甲状旁腺及甲状腺疾病者。所有的受试者进行静脉采血。 1.2 研究方法 1.2.1 DNA的提取：用EDTA抗凝管经无菌操作抽取体检者外周血3ml，于-80℃保存备用。使用天根生化科技有限公司提供的DNA提取试剂盒提取DNA。 1.2.2 PCR扩增: 参照同类研究序列[5] 设计引物： 上游引物：5rsquo;-GGCAACCTGAAGGGAGACGTA-3rsquo; ；下游引物：5rsquo;-CTCTTTGGACCTCATCACCGAC-3rsquo; ，（由博迈德生物工程有限公司提供）。反应体系:模板DNA1.5ul，2times;Taq MasterMix 12.5ul,引物各1ul 10mu;M)，泳去离子水补齐至25ul。反应条件为：94oC预变性5min，94oC变性45s，57oC退火45s, 72oC延伸45s，共35个循环，最后72oC延伸10min。扩增的目的基因片段长度为461bp，取产物5ul经2%的琼脂糖凝胶电泳，然后应用凝胶成像分析系统分析，确认PCR反应产物。 1.2.3　PCR产物的限制性酶切　PCR扩增产物6ul，加限制性内切酶Tru9 I 1ul(10,000U/ml，纽英伦生物技术（北京）有限公司提供)，10times;buffer 2ul，去离子水补齐至20ul。37oC水浴4h。电泳分离酶切产物,紫光灯下观察电泳用 PCR 技术扩增出含有 VDR-Tru9 I