缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤中超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）及超微结构的影响.docVIP

精品论文 参考文献 缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤中超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）及超微结构的影响 （扬州大学第二临床医学院 江苏 扬州 215000） 【摘要】目的：研究缺血预处理(IP)对大鼠肝脏缺血再灌注(I/R)损伤中超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）及超微结构的影响。方法：健康成年雄性SD大鼠随机分为3组(每组5只)。正常组(N组)；缺血再灌注(I/R)组；缺血预处理(IP)组。各组均在术后3h后取组织进行检测。酶标仪检测肝脏匀浆超氧化物歧化酶（SOD）及一氧化氮（NO）的含量；用透射电子显微镜观察各组心肌组织的超微结构，并进行线粒体评分。结果：与单纯I/R相比，IP预处理明显增加SOD含量同时减少NO释放 (Plt;0.05)；电镜显示肝癌细胞N组结构正常，I/R组损伤最严重，IP组介于N组与I/R组之间。N组、IP组线粒体评分均低于I/R组(Plt;0.05)。结论：缺血/再灌注可对肝脏细胞超微结构造成严重损伤，使线粒体评分分值增加，造成肝脏损害。缺血预处理可产生肝脏保护作用。 【关键词】肝脏缺血再灌注；缺血预处理；SOD、NO；超微结构 肝脏缺血预处理（IP）是指一次或多次短暂性肝脏缺血再灌注后．诱导肝脏组织产生内源性保护机制，使其对以后较长时间的缺血性损伤产生显著的耐受[1]。本实验旨在探究IP减轻大鼠肝脏I/R损伤的相关机制，SOD、NO，线粒体超微结构激的影响。 1.材料与方法 1. 1实验动物分组：健康雄性SD大鼠,鼠龄10-12周, 体质量250-300g, 共15只，随机分为3组(每组5只)。所有动物术前12h禁食，自由进水，采用戊巴比妥麻醉，固定动物，常规脱毛消毒。取上腹部正中直切口约3cm，进腹后找到肝十二指肠韧带（所有动物实验符合扬州大学动物伦理委员会要求）。各组大鼠处理：N组：仅行麻醉、剖腹，保持开腹时间与IR组相同IR组：游离肝周韧带，解剖肝门，完成Pringle法，用无创血管夹夹闭第一肝门，完全阻断入肝血流，持续30min后撤除血管夹，恢复入肝血流，记时间点，逐层关腹，术后自由饮食。IP组：在I/R前先阻断肝左、叶血流10 min，然后开放血流10 min，其余步骤同I/R模型组。各组均在灌注3h后取材检测。 1.2检测方法 1.2.1 SOD及NO含量测定 肝脏再缺血再灌注后收集肝脏组织，置入0.9%氯化钠盐水中清洗表面血液后置入液氮中冻存，使用时利用生理盐水制成10%组织匀浆，采用采用比色法测定肝脏组织匀浆中NO的含量及SOD的活性；采用SOD及NO试剂盒（南京凯基生物科技有限公司），SOD、NO含量。 1.2.2 肝脏超微结构的观察 透射电镜观察：移植后取新鲜肝组织约1times;1times;1(mm)，用2.5％戊二醛前固定，1％锇酸后固定，梯度乙醇脱水后氧化丙烯浸透，环氧树脂包埋，超薄切片，将超薄切片置于透射电子显微镜下观察并拍照。同时进行线粒体损伤评分。每个电镜标本随机选择5个视野，每个视野随机选择20个线粒体，使线粒体总数达100个，采用Flameng评分标准 (见表1) ，将观察到的每个线粒体损害程度按0~4级，分别计为0~4分，最后将100个线粒体所得总分除以100，既为该标本得分，分数越高，表示线粒体损伤越重，具体标准参考文献[2]制定。 1.3统计学方法 采用SPSS 18.0软件进行数据分析，计量资料以均数plusmn;标准差表示，组间比较采用单因素方差分析，Plt;0.05为差异有统计学意义。 2.结果 2.1肝脏SOD、NO含量变化 与N组比较，IR组和IP组肝脏组织NO水平升高，SOD活性降低(Plt;0.05)。与I/R组相比，IP组NO含量降低，有统计学意义(F=18.64,Plt;0.05)；与I/R组相比，IP组SOD含量增高，有统计学意义(F=50.82,Plt;0.05)。 2.3线粒体评分 线粒体评分采用线粒体Flameng评分法，对各组大鼠肝脏组织线粒体评分，结果显示：N组为（0.201plusmn;0.051）分，IP组（1.031plusmn;0.061）分，I/R组为（3.201plusmn;0.037）分。I/R组明显高于IP组，差异有显著性（Plt;0.01）；IP组明显高于N组，差异有显著性（Plt;0.01）。 3.讨论 研究表明一定的缺血预处理可以减轻器官的损伤，比如脑，心脏[3]。缺血预处理对于肝脏的相关保护机制目前研究较少，因此我们运用SD大鼠作为动物模型，建立缺血再灌注模型，并进行缺血预处理，阐释缺血预处理去肝脏缺血再灌注