根霉脂肪酶准分子激光育种的研讨.pdf

发酵工程学科的进展 ——第四班叁回发酵工程学术讨论套论文集 根霉脂肪酶准分子激光育种的研究． 郑敏1，吴克1，潘仁瑞1，刘斌1，蔡敬民1，睬末荣2 (1．台肥学院生物与环境工程幕t台中科院安徽光学精密机械研究所，合肥230031) 摘要：利用XeCI准分子蓉外激光照射步根根零孢囊孢子，以期获得脂肪酶的高产菌株．为 提高脂肪酶的发酵单位，开发脂肪霹的斯用逮提供良好的基础。在研究紫外澈光辐射根零 曲生曲学效应时发理t在麒射琦串为2．0．2．5和2．7kV，脉冲次数为35～135曲范围内，其致 死曲线在85脉冲次数赴形成高峰，在110脉冲次数赴形成低罄，构成一十。蜂形”曲线}与紫 外灯uv致死曲线有较大的差别．通过琼脂平板分青、同态发酵．从中筛选到8株脂肪酶活 力提高幅度10％以上的菌株，其中以宪麦株LB一5的肆活力最高，达66．4IU／g于基．较出 发菌株啐活提高了55．1“。 同时本文还通过对激光照射功率，脉冲次数和致死率与根霉脂肪本活力之问的关系曲 分析讨论．为激光谱囊育种技术在微生物学中的应用积粟一些经验，为更加有效地利用激 光，扩大激光的应用范围摸索条件． 本文利用XeCI准分子激光器对少根根霉Pw357进行了激光诱变处理，以期获得脂 肪酶的高产菌株，同时为激光诱变育种技术在微生物学中的应用积累一些经验，为更加 有效地利用激光，扩大激光的应用范围摸索条件。 1材料与方法 1．1菌种 少根根霉(Rhizopusarrhizus)Pw357，由本系微生物实验室提供。． 1．2培养基与试剂 1．2．1菌种保藏培养基；PDA培养基。 1．2．2产孢斜面培养基(g／L)：PDA加CaCOa109． 1．2．3暗培养毕板培养基：PDA加0．06％脱氧胆酸钠。 然。 1．2．5聚乙烯醇(PVA)乳化液的配制伽． 1．3方法 E．C 3．1．1．3)酶活的测定方法嘲 1．3．1脂肪酶(Lipase 1．3．2诱变方法嘞 1)诱变用孢子悬液配制：将活化后的孢子洗脱，打散后准确稀释至5×105个／mL． 2)诱变处理； 吸取上述孢子悬液于石英试管中，置；t=308nm的激光下边振荡边辐射处理。 郑啦等z根霉脂肪酶准分子激光育种的研究 15 2仪器 3结果与讨论 3．I激光对根霉孢子的生物学效应试验： 根霉孢囊孢子后，其致死率的变化尚未查 阅到相关的参考资料。我们在初步试验 的基础上，选择了低、中、高三个功率参 度的脉冲次数(35～135)进行处理。从图 1的结果分析，当脉冲次数≤60时，照射 功率与致死率有一定的相关性，即照射的 功率高，孢子的死亡率也高；当脉冲次数 ≥85时，三种功率处理孢子的死亡率规 圈l在不同功率条件下梯度脉冲 律性参差不齐但都随着脉冲次数的增加 对根霉孢子的致耗曲线 而上升；脉冲次数再增至110时，三种功 率处理的孢予死亡率都有不同程度的下降，从而形成一个“峰形”曲线}脉冲次数再增至 135时，则出现不同的情况，低功率照射的致死率继续缓慢下降；而中高功率照射的致死 率又再度上升。如再增加脉冲次数有两种可能，一种是致死率继续升高；另一种可能是 致死率再