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人教版新课标选修1--pcr PPT
实验一、聚合酶链式反应－PCR;一、实验原理：;１．DNA模板：反应中DNA量在50ng～200ng左右。且DNA纯度较
高， 以增加反应特异性。
２．dNTP:反应体系中达100μM～200μM。
３．Mg2+：Mg2+是Taq酶的辅基浓度在2.0mM左右，浓度太低
Taq酶活力降低；太高反应特异性降低。
４．引物：根据目的基因两侧特定序列设计。引物约20碱基
左右；G+C含量在40％－70％之间；引物内部不能有回该
序列；引物３’端不能互补。
５．Taq酶：它是从嗜热杆菌中提取的耐热性ＤＮＡ聚合酶，在95℃时30分钟还有50％活力。;PCR过程示意图; 二、实验所需器材和试剂
器材：
台式高速离心机，恒温水浴锅，PCR扩增仪，琼脂糖
凝胶电泳系统，凝胶成像系统，Eppendorf离心管，
PCR小管 ;;注意事项：同时设立对照组（对照组不加模板DNA）
;2、按以下参数进行PCR扩增（对于不同的PCR反应应设置不同的反应条件）
94℃ 4分钟
94℃ 30秒
51℃ 30秒 进行30个循环
72℃ 30秒
72℃ 5分钟
4℃ ;将实验组与对照组放入PCR仪，按设定好的条件进行扩增;3、扩增结束后，取5ul产物进行琼脂糖凝胶电泳以观察结果
;四、作业
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