联合诱导法制备大鼠肝S9及蛋白含量的测定.docVIP

精品论文 参考文献 联合诱导法制备大鼠肝S9及蛋白含量的测定 余大为 侯言东(通讯作者) （甘肃省疾病预防控制中心 730020） 【中图分类号】R446.63 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）22-0196-02 【摘要】 目的 测定联合诱导法和多氯联苯诱导法制备的大鼠肝S9的蛋白含量并对这两种方法进行比较。方法　采用苯巴比妥与beta;—萘黄酮合并诱导所获S9作为诱导剂制备大鼠肝S9,并采用Bradford法测定所制备的S9蛋白含量。结果　成功制得大鼠肝S9,并测定其蛋白含量为26.73 mg/ml。结论　联合诱导法可以替代多氯联苯诱导法制备肝匀浆S9。 【关键词】联合诱导法 S9制备 蛋白含量测定 Preparation of rat liver S9 by combination inducing method and determination of protein in the prepared S9 Yu Dawei, Houyandong*, (Gansu Provincial Center for Disease Control ＆ Prevention, Lanzhou 730000) 【ABSTRACT】 Objective: To determine the content of protein in rat liver S9 prepared by combination inducing method and PCB inducing method and compare the two methods. Methods: Rat liver S9 was prepared using S9 obtained by combination inducing method with phenobarbital and beta;-naphthoflavone as the inducer and the content of protein in the prepared S9 was determined by Bradford method. Results: Rat liver S9 was successfully prepared and the protein content was 26.73 mg/ml. Conclusion: Combination inducing method may supersede PCB inducing method for preparation of liver homogenate S9. 【Key words】 combination inducing method S9 preparation protein determination 多氯联苯(Polychlorinated biphenyls , PCBs)是一种极其稳定的致癌剂，目前环境中所存在的10亿多磅多氯联苯已引起人们的关注。由于多氯联苯理化性质极为粘稠稳定很难处理，加之对动物尸体的处置也存在着一定的麻烦，同时因S9组分含有少量的多氯联苯残留物，故其与其他致癌剂相比，多氯联苯对实验室工作人员有着更大的潜在危害。为此去寻找一种可用于诱导S9的多氯联苯替代物将会给工作带来益处。[1]Matsushima等人比较两种诱导剂的诱导效果，发现用苯巴比妥(Phenobarbital, PB)与beta;—萘黄酮（Benzoflavone, BF)合并诱导所获S9的活化力与多氯联苯所获结果相似。[2]因此,本文采用苯巴比妥与beta;—萘黄酮合并诱导作为诱导剂,制备S9,并采用Bradford法测定所制备的S9的蛋白含量, 进而研究有效的S9代谢活化酶系统制备方法和测定方法。 1. 试药与仪器 1.1 药品与试剂 KCl(分析纯), 苯巴比妥(分析纯), beta;—萘黄酮,多氯联苯 (天津疾控毒理学部提供), MgCl2，6 H2O(分析纯 )PBS缓冲液 (自配 ), 6-磷酸葡萄糖 (glucose-6-phosphate, Sigma, 美国), 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 (辅酶Ⅱnicotinamide-adenine dinucleotide phosphate, NADP, Sigma, 美国), Bradford法蛋白测定试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公司)。 1.2 仪器 冷冻高速离心机(Beckman, AllegraTM2-16K, 美国)；紫外可见分光光度计 1.3 实验动物及饲养条件