冰晶对黏附细胞损伤的研讨.pdf

工程热物理学会 传热传质学 第十二届年会 编号：063294 冰晶对黏附细胞损伤的研究 刘宝林 (上海理工大学低温医学与食品冷冻研究所 上海200093) 电话：021 E-mail：blliuk@163．com 摘要低温冻结保存过程中，冰晶足造成细胞损伤的主要因素之一．本研究运用方向性冰品生长实验 台，定量研究了胞外冰晶对黏附细胞的损伤。结果表明，但冰品生长方向与黏附细胞的央角以0-300 别为49．0+19．0％，42．8±15．8％，表明细胞成活率同冰品与黏附细胞的接触蘧积有关。 关键词：低温保存；冰品；黏附细胞 1引言 ，组织工程(TissueEnginedring)的含义是，将细胞种植在生物材料的表面并放于 生物反应器中加以培养，生成的组织或器官可用于临床移植，以修复人体原来损伤的组 织。近十几年来，随着组织工程的迅速发展，越来越多的人工组织和器官将趋向商业化 生产，从而迫切需要人们寻求其长期有效的保存方法，以便在病人需要时能及时供给， 解除患者的痛苦。 目前，冻结保存是一种普遍应用的保存方法。在冻结保存过程中，冰晶损伤是导致 细胞死亡的主要因素之一n1。冰品损伤包括“胞内冰”损伤和“胞外冰”损伤两种。“胞 内冰”是由于冷却速率过快而造成的，对此人们已进行了很多深入的研究心{1。“胞外冰” 的形成和生长会挤压、剪切、刺穿细胞，从而造成细胞死亡，在该方面的研究还较少。 如何减小冰晶的损伤，是细胞、组织成功低温保存的关键。本文采用方向性冰品生长低 温台于显微镜技术相结合，定量地研究了细胞外冰晶对细胞的损伤。 2材料与方法 2．1细胞培养 lmm 将老鼠成骨细胞放在盛有5mla-MEM培养液的培养皿中，培养皿底部放直径为l 的盖薄片，培养皿置于37。c、5％coz的培养箱中进行细胞培养。当细胞覆盖了培养皿 ‘ 面积的60％B寸，黏附在盖薄片上的细胞可以用于实验。 2．2方向性冰晶低温台 根据传热学原理，对于如图l(A)所示的方向性冰品低温台，有以下条件成立一：： 760 (1)玻璃片与冷、热源的接触热阻很小； (2)沿玻璃片厚度方向的温度是均匀的； (3)．玻璃片的导热远远大于盖薄片的导热： (4)通过玻璃片的导热远远大于玻璃片与环境的对流换热； (5)玻璃片的导热远远高于样品的吲化前热。 那么，距热源为X处的温度则可表示为： T(x)=瓦一÷(瓦一瓦) 两边对时间求导，可以得到方向性冰品低温台的降温速率计算公式： dT’(x)ldt=瓦一挈妄 其中，dx／dt为玻璃片的移动速度，可以由图1(B)中的步进电机参数计算得出。 磊 =嘉＼! 细胞盖薄片、、——一 玻璃片 ’ ＼． 1 一——◆ Th Tc l—L。 (A)简图 (B)装配图 图1方向性冰品低温台简图及其装配图 2．3低温显微镜系统 低温显微镜为Nikon800，将方向性冰品低温台固定在显微镜的样品台上，热端温 度由恒温水浴控制在370C，冷端接液氮，温度可调，最低温度可达到一150。C。显微镜外 接CCD摄像机以及录像机，这样，在显微镜下能观察到细胞的整个冻结过程，并可以