灰白蚕蛾核型多角体病毒的初步研讨.pdf

研究论文 灰白蚕蛾核型多角体病毒的初步研究’ J■● 龚静1 王晓容2 阮琳3 田明义1 (1华南农业大学昆虫学系，广州510640； 摘要：采用差异离心、蔗糖梯度离心、超薄切片与电镜技术对灰白蚕蛾核型多角体病毒 (OvNPV)进行分离纯化及超微结构观察。OvNPV较细小。多为不规则形，测得多角体的大小 X102—1．5X106 约为26．7nm，长度约240llm。用OvNPV悬浮液1．5 PIB／ml感染灰白蚕蛾3龄 幼虫，死亡率为53．49％一98．84％，表明OvNPV对灰白蚕蛾具有较强的致病力。 关键词：灰白蚕蛾；核型多角体病毒；微结构；致病力 varians 灰白蚕蛾(Ocinara 在华南地区为害细叶榕(Ficus altissi— microcarpa)、垂叶榕(Fbenjamina)、黄葛榕(F ma)等桑科榕属植物。灰白蚕蛾幼虫取食叶片，末龄幼虫暴食，大发生时可吃光叶片， 仅余枝干，严重影响树木的生长和城市的风貌【l、2]。目前，该虫已成为广州地区园林植物 上非常严重的害虫，给城市绿化造成很大的损失【3J。 variansWalkernuclear 灰白蚕蛾核型多角体病毒(Ocinara polyhedrosisvirus，简称 OvNPV)早在1983年就被发现和鉴定【4J，但未见系统的研究报道。本文对OvNPV形态 及其致病力进行了初步观察，现将结果报道如下。 1材料与方法 1．1病虫的收集 将采集的自然罹病灰白蚕蛾幼虫虫尸经初步提纯，感染健康幼虫，待供试虫感染发病 后，取濒死幼虫，作为灰白蚕蛾核型多角体病毒来源，供下一步试验用。 1．2 OvNPV的分离纯化 将感病死亡的灰白蚕蛾幼虫加少量蒸馏水置研磨器中研磨，用三层纱布过滤。滤液以 500rpm离心5min，取上清液，又以3 管吹打散开，然后再重复一次500rpm离心5min以及3 制30％、40％、50％和60％四个浓度的蔗糖溶液，粗提品经蔗糖梯度离心，得纯净的病 X109PIB／ml的病毒悬液，保 毒多角体。病毒悬液用血球计数板计数，配制成浓度为1．5 存于4℃冰箱中。 ·基金项目：广州市重大科技攻关项目(200322E014) 作者简介：龚静，女，在读硕士研究生，研究方向为农业昆虫与害虫防治 edu．CB ·}通讯作者：田明义，男，博士，教授。Tel：020E．mail：mytian@8Carl 科技创新与绿色植保 1．3 OvNPV的光学显微镜观察 用镊子取濒死幼虫的组织液涂布于载玻片上，用核型多角体病毒的染色方法，染色观 察。光学显微镜下显示背景淡红色，红色颗粒为OvNPV。 1．4 OvNPV的扫描电镜观察 取纯净的病毒多角体在Hcp一2型临界点干燥仪下干燥，IB．5型离子溅射仪镀膜， XL一30 ESEM环境扫描电子显微镜下观察、拍照。 1．5 OvNPV的透射电镜观察 将纯净的病毒多角体在5 100％的酒精逐级脱水后再用经无水硫酸铜处理过的100％酒精进行脱水，每级脱水 1、l：l、l：3渗透处理后，进行纯包埋剂包埋，分别放置37℃下聚合12h。聚合后用超 薄切片机切片，于透射电镜下观察病毒内部结构。 1．6致病力测定 X PIB／ml于