相萃取技术讲义——奥秘科技固相萃取法培训教程-课件PPT.ppt

全自动固相萃取仪 全自动固相萃取仪能自动完成固相萃取的全部步骤 固相萃取法讲义 卢志浩 奥秘科技有限公司 luzh@ 客服：0531-8856-3956 一、概述 所谓萃取法 ,就是从样品中提取组分 ,传统的方法是液-液萃取法 ( LLE) ,即用液体作为提取剂。 固相萃取（Solid Phase Extraction, SPE） 是19世纪70年代后期发展起来的样品前处理技术。它发展迅速，广泛应用于环境、制药、临床医学、食品等领域 。 固相萃取（SPE）是利用固体吸附剂将样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱，达到分离和和富集的目的。先使样品通过一装有吸附剂（固相）小柱，保留其中某些组分，再选用适当的溶剂冲洗杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱，从而达到快速分离净化与浓缩的目的。 一、概述 与液液萃取相比，固相萃取具有如下优点： ①回收率和富集倍数高②有机溶剂消耗量低，可减少对环境的污染③采用高效、高选择性的吸附剂，能更有效的将分析物与干扰组分分离④无相分离操作过程，容易收集分析物⑤能处理小体积试样⑥操作简便、快速，费用低，易于实现自动化及与其他分析仪器连用。 一、概述 样品类型 SPE可以用于所有类型样品的处理，但是液体样品是最容易处理的。 Survey response % 2.固相萃取的分离模式 反相固相萃取 正相固相萃取 离子交换萃取 免疫亲和 有机溶剂非极性顺序 正己烷环己烷四氯化碳甲苯苯无水乙醚氯仿二氯甲烷四氢呋喃乙酸乙酯丙酮乙腈异丙醇甲醇水乙酸 反相固相萃取 反相：吸附剂（固定相）是非极性或弱极性的，如硅胶键合C18,C8, C4，C2,-苯基等。流动相为极性（水溶液）或中等极性样品基质。 吸附剂的极性小于洗脱液的极性。 应用：可以从强极性的溶剂中（如水样）萃取是非极性或弱极性的化合物。 作用机理：非极性-非极性相互作用，如范德华力或色散力。 正相固相萃取 吸附剂：极性键合相，如硅胶键合－NH2、－CN，-Diol（二醇基）；极性吸附剂，如silica、florisil、(A-,N-,B-)alumina、硅藻土等。流动相为中等极性到非极性样品基质。 作用机理： 1）极性-极性相互作用 2）表面硅羟基、铝羟基与极性化合物的极性官 能团之间相互作用，包括氢键，π-π键等。 3）偶极-偶极相互作用 4）偶极-诱导偶极相互作用 应用：从非极性溶剂样品中萃取极性化合物 硅胶柱(silica) 表面－SiOH,中等强度的吸附剂，适用于从非极性基体中吸附极性化合物。 硅胶是一种酸性吸附剂，可以吸附酸性（有机酸类）或中性的极性化合物，由于表面的硅醇基可以释放出弱酸性的氢离子，又作为一种弱酸性阳离子交换剂，吸附碱性化合物（生物碱类，胺类）。 活性（吸附性）与硅胶的含水量有关，根据其中含水量不同分为不同的活性等级。 硅胶的活化：加热到100-110度，除去表面吸附的水份，当温度升到500度，表面的硅醇基脱水变成硅氧烷键，从而丧失吸附性。 硅胶极亲水：分析的样品溶液必须无水。 备注：硅胶净化时，一般杂质保留在柱上，目标化合 物流出。 离子交换固相萃取 离子交换固相萃取用于萃取分离带有电荷的分析物 固定相为带电荷的离子交换树脂，流动相为中等极性到非极性样品基质。 分析物与吸附剂间的作用是静电吸引力。 离子交换固相萃取分为阴离子交换固相萃取和阳离子交换固相萃取。 免疫亲和 即将抗体偶联到固相载体而制成免疫亲和层析柱，可对样品中能与抗体结合的特异性抗原分子进行分离、纯化。 例：将抗原结合于亲和层析基质上，就可以从血清中分离其对应的抗体。金黄色葡萄球菌蛋白A（ProteinA）能够与免疫球蛋白G（IgG）结合，可以用于分离各种IgG。 三、固相萃取的操作步骤 一个完整的固相萃取步骤包括固相萃取柱的预处理、上样、洗去干扰物质、洗脱及收集分析物四个步骤。 a.固相萃取柱的预处理 一是为了润湿和活化固相萃取填料，二是为了除去填料中可能存在的杂质，减少污染。 采取的方法是用一定量溶剂冲洗萃取柱。 方法： 反相类型的固相萃取硅胶和非极性吸附剂介质，通常用水溶性有机溶剂如甲醇预处理，然后用水或缓冲溶液替换滞留在柱中的甲醇。 正相类型的固相萃取硅胶和极性吸附剂介质，通常用样品所在的有机溶剂来预处理。 离子交换填料一般用3～5mL 去离子水或低浓度的离子缓冲溶液来预处理。 注意事项：固相萃取填料从预处理到样品加人都应保持湿润，如果在样品加人之前，萃取柱中的填料干了，需要重复预处理过程。 b.上样 将样品倒入活化后的SPE 小柱，然后利用加压、抽真空或离心的方法使样品进入吸附剂。采取手动或泵以正压推动或负压抽吸方式，使液体样品以适当流速通过固相萃取柱，此时，样品