厌氧培养的规范化操作.pptxVIP

泰兴市人民医院检验科微生物室 刘鸿丽;概述: 厌氧菌感染通常是内源性的，存在于人体的各个部位，病种遍及临床各科。各种器官和组织都可以发生厌氧菌感染，大部分是与需养菌混合感染。常规细菌培养阴性，很有可能是厌氧菌感染。因此，进一步分离鉴定病原菌对感染的诊断、治疗有重要意义。;实验器材 1.产生和保持厌氧环境的仪器和设备：生物梅里埃 2.API快速32A鉴定系统条 3.厌氧血平板：生物梅里埃 4.革兰氏染液：自备 5.抗生素纸片：BD、OXOID ;1.采集原则 1）在疾病早期或症状、体征明显时，最好在抗生素使用之前采集。 2）一般选择深部的脓液或组织，以穿刺或手术方法采集标本。 3）标本标明病人的姓名、住院号、来源、特殊部位、采集日期、时间和最初的采集者。 4）标本放在无菌并且有利于可疑病原菌生长的容器内，防止渗漏和潜在的安全隐患。本实验室推荐用无菌针管抽取后排除气体，用无菌橡皮塞封住针头后立即送检 ;2.具体采样要求 1）从正常无菌部位或通过严格无菌操作采取，如血液、胸腔液、腹腔液、心包积液、CSF、关节液以及通过外科无菌手术或穿刺抽得脓液，或通过特殊技术如纤维支气管镜取得下呼吸道标本及由阴道后窟窿穿刺抽得盆腔脓液等。采集和运输过程中应避免接触空气，及时送检。 2）经口吐出的痰不能避免咽喉部正常菌群感染，不适宜做厌氧菌培养。可用纤维支气管镜采集。人工气道如气管切开或气管插管患者，可用吸痰管理经人工气道口插至叶支气管水平吸引痰液。 ;3.样品拒收标准 1）使用不合格的容器：有渗漏、污染或非无菌的容器。 2）申请单不符合要求：无姓名、住院/门诊号，无检验目的，检验目的与标本不符合。 3）标本不符合要求：未与空气隔绝，要求做厌氧菌培养，经口吐出的痰要求做厌氧菌培养。采样至送检超过2小时而未用运用培养基等。 ;2.操作说明 1）样品 深部脓肿、胸腹水、胆汁、CSF离心浓缩等厌氧标本。 2）接种 厌氧平板，置厌氧箱（80%N2、10%H2、10%CO2）35℃48~72小时。 3）镜检 观察平板上的菌落，挑选可疑菌落涂片，革兰色染色 4）耐氧试验和生化反应 5）鉴定流程 ;厌氧菌鉴???流程 转种需氧培养 转种厌氧培养 ↓　　　　　　　　 ↓ 35℃18-24h 35℃48~72h 　　　　 　　　　　　　　　 　 ↓　　　↓　　　　 ↓ 阳性 阴性 阳性 　　　 ↓　　 ↓　　　　　↓ 做需氧菌鉴定 考 虑 厌 氧 菌 　　　　　　　　　 ↓ 菌落革兰色染色、触酶试验、API20A鉴定 报告 报告菌种名或厌氧菌未生长