第八章 分子克隆技术.ppt

琼脂糖凝胶电泳: 不同构型的DNA，其迁移率不同，最前面的是SC DNA，依此为L DNA 和OC DNA。 质粒在寄主细胞中的作用: “友好”地“借居”在宿主细胞中，既不杀死细胞，对宿主的代谢活动也无影响； 借助本身带进去的基因在细胞中表达其遗传信息，编码一些重要的非染色体控制的遗传性状，为宿主执行一些适当的遗传功能。如对抗菌素的抗性，对重金属的抗性等。 质粒的类型: 松弛型质粒（relaxed plasmid ）：分子量较小，不具传递能力。其复制在松弛控制下进行。每个细胞拷贝数约10－200个。 根据质粒在细胞中拷贝数目的多少，分为： 严谨型质粒（stringent plasmid ）：分子量较大，多是具传递能力的大质粒；DNA复制与宿主染色体DNA的复制相偶联，受到某种程度的控制；每个细胞仅1－2个拷贝。 改造载体: 1.1 pBR322（万能质粒） 大小：4.3kb 复制子：松弛型 筛选标记：ampr, tetr 单一切点：EcoRⅠ , Hind Ⅲ, BamHⅠ 等. 插入失活：PstⅠ, PvuⅠ 等; SalⅠ, SphⅠ 等. pBR322的优点： 具有较小的相对分子质量(4361bp); 具有两种抗菌素抗性基因可供作转化子的选择记号(Ampr和Tetr); MCS具有多个单酶切位点，可供外源基因的插入； 具有较高的拷贝数（25个,