第六章 细胞培养的基本技术.pptVIP

第三节传代培养和细胞系的维持 传代培养的原因？ 原代培养后，由于细胞数量增加，整个培养器皿，逐渐被细胞覆盖，如果不进行传代培养细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。 一、原代培养的首次传代 传代：细胞由原代培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的过程称为传代。 二、细胞传代方法 1、贴壁细胞的消化法传代 二、细胞传代方法 1、贴壁细胞的消化法传代 （1）吸出或倒掉瓶内的旧培养液。 （2）加入适量的消化液消化。 （3）镜检，发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，应立即终止消化 （4）吹打瓶壁细胞，制成细胞悬液 （5）技术，接种到新的培养瓶。 二、细胞传代方法 1、悬浮细胞的传代 悬浮细胞多采用离心方法传代，即将细胞连同培养液一并转移到离心管内，800-1000rpm离心5min,然后取出上清，加入新的培养液到离心管内，用吸管吹打使之形成细胞悬液，然后传代接种。 细胞系的维持是通过换液，传代，再换液、再传代和细胞冻存实现的。 三、培养细胞的维持 细胞系的维持注意的要点： 1、细胞系档案要记录好。 2、细胞系的传代、换液一般都有自身的规律性，要注意保持其稳定的规律性。 3、多种细胞系维持传代，要严格操作程序，以防细胞之间交叉污染。 4、每一种细胞都应有充足的冻存储备。 四、细胞培养的常规检查 1、检查营养液的pH值。 新鲜培养液呈橙红色（pH7.2） 细胞生长旺盛，代谢产