Pierce直接IP（免疫沉淀）试剂盒26148-ThermoFisherScientific.PDFVIP

说明书 Pierce®直接IP （免疫沉淀）试剂盒 26148 2121.6 货号 描述 26148 Pierce 直接IP 试剂盒，包含足够进行50 次免疫沉淀反应的试剂（每次使用10 μL 树 脂固相化抗体） 试剂盒组分： 加强型AminoLink®偶联树脂，2 mL 固相树脂以50%的浆液形式提供（例如，100 μL 50% 的浆液含有50 μL 固相树脂 ） 20 ×交联缓冲液，25 mL ，使用时稀释至：0.01M Na PO ，0.15M NaCl ；pH 7.2 3 4 氰基硼氢化钠溶液 （5 M ），0.5 mL 淬灭缓冲液，50 mL ，1M Tris-HCl 洗涤缓冲液，60 mL，1M NaCl IP 裂解/洗涤缓冲液，2 × 50 mL ，0.025M Tris，0.15M NaCl，0.001M EDTA，1% NP-40 ， 5%甘油，pH 7.4 100 ×条件缓冲液，5 mL ，中性pH 缓冲液 20 × Tris-缓冲盐溶液，25 mL，使用时稀释至0.025M Tris，0.15M NaCl ；pH 7.2 洗脱缓冲液，50 mL，pH 2.8 ，含有伯胺 非还原型泳道标记上样缓冲液，（5 ×），5 mL，0.3M Tris-HCl ，5% SDS，50%甘油， 泳道标记示踪染料；pH 6.8 Pierce 离心柱-带螺帽，100 个柱子，包含相应配件 微量离心收集管，2 mL ， 100 个 微量离心样品管，1.5 mL， 50 个 Pierce 对照用琼脂糖树脂（4 ％琼脂糖珠交联），2 mL 固相树脂以50%的浆液形式提供 （例如，100 μL 50%的浆液含有50 μL 固相树脂） 储存：收到试剂盒后将其储存于4°C 。将DSS 于4°C 干燥保存。常温运输。 产品简介 Thermo Scientific Pierce 直接IP 试剂盒通过将纯化的抗体直接固定于琼脂糖介质，从而使 抗原高效、快捷地发生免疫沉淀反应。固定化抗体提供了更快速、更简捷的免疫沉淀方法，同 时固定化的抗体可以重复使用，且纯化的抗原可避免抗体的干扰。该试剂盒通过简单的固定化 操作，可用少于10 μg 抗体完成免疫沉淀反应。当抗体与Thermo Scientific Pierce AminoLink 偶 联树脂结合后，将抗原样品与固定化的抗体共同孵育形成免疫复合物。洗涤免疫复合物去除未 结合的杂质，然后用低pH 的洗脱缓冲液将与抗体结合的抗原洗脱。 与传统方法相比，直接IP 试剂盒使用胺基活化的介质，不包含蛋白A 或蛋白G，也不需要 交联剂做共价固定。因此，该方法可以结合任何含有伯胺的分子，而不要求与蛋白A 或蛋白G 强烈结合的特定抗体种类或亚型。试剂盒包含获得高抗原产量的优化缓冲液，以及最大程度减 少处理和混合时间的高效离心柱和收集管。 重要产品信息 • 抗体溶液中的伯胺（如，Tris ，甘氨酸），会竞争性地结合树脂上的位点。在交联反应之前， 使用Thermo Scientific Zaba 脱盐离心柱或Slide-A-Lyzer 透析卡去除伯胺。 • 明胶或抗体溶液中的载体蛋白会竞争性的结合树脂上的位点。用Thermo Scientific Pierce 抗 体纯化试剂盒（货号：44600 ）去除明胶和载体蛋白，或者使用蛋白A / G 进行纯化（货号： 20423 ）及透析。 • 在室温下进行抗体交联。在4℃下进行细胞裂解和抗原IP 。 • 树脂的所有离心步骤需在低速（如 1000×g）、30-60 秒条件下操作。离心速度大于 5000×g 可能会导致树脂聚集，难以重悬。 • 离心柱离心过程中，使用2 ml 收集管时流穿液体的体积应不超过600 μL，使用1.5 ml 的收 集管时则应不超过300 μL。体积超出可能导致柱内产生回压及洗涤和洗