T3基因型柑橘衰退病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建.PDFVIP

园艺学报，2015 ，42 (1) ：183 –190. Acta Horticulturae Sinica doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2014-0740；http ：//www. ahs. ac. cn 183 T3 基因型柑橘衰退病毒实时荧光定量RT-PCR 检测体系的建立及应用 1,2 2 1 2 2 2,* 2,* 陶珍珍 ，李中安 ，贾 敏 ，唐 萌 ，唐科志 ，周常勇 ，周 彦 1 2 （西南大学植物保护学院，重庆 400715 ； 中国农业科学院柑桔研究所，重庆 400712 ） 摘 要：根据不同基因型柑橘衰退病毒（Citrus tristeza virus，CTV ）ORF1a 的序列差异，设计T3 基 因型CTV 的特异性引物T3-4F/R，通过优化得到最佳反应条件建立T3 基因型CTV 分离株的SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量 RT-PCR ，并进行灵敏性、重复性试验。应用该方法测定柑橘植株中 T3 基因型 CTV 分离株 含量。建立了一种特异性检测 T3 基因型 CTV 分离株的 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR 检测方法， 其灵敏性比普通 RT-PCR 方法高 100 倍。标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系，扩增效率为 97.1%，相关性系数为 0.992 。组内和组间变异系数均小于 2.94% ，表明该方法重复性好。田间样品中 T3 基因型 CTV 含量差异较大，最高含量是最低含量的 1 250 倍。本研究中建立的实时荧光定量 RT-PCR 检 测方法能够准确检测柑橘植株内的 T3 基因型 CTV 分离株，可用于研究 T3 基因型的 CTV 的变化规律。 关键词：柑橘衰退病毒；T3 基因型；实时荧光定量 RT-PCR 中图分类号：S 666 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2015 ）01-0183-08 Development and Application of a Quantitative RT-PCR Approach for Quantification of T3 Genotype of Citrus tristeza virus 1,2 2 1 2 2 2,* TAO Zhen-zhen ，LI Zhong-an ，JIA Min ，TANG Meng ，TANG Ke-zhi ，ZHOU Chang-yong ， and ZHOU Yan2,* 1 2 （College of Plant Protection，Southwest University ，Chongqing 400715 ，China； Citrus Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences ，Chongqing 400712 ，China ） Abstract ：This study established a quantitative RT-PCR method with primers T3-4F/R based on the conserved nucleotide sequence of Citrus tristeza virus （CTV ）gene ORF1a. The results showed that the me