穿心莲内酯诱导髓系白血病细胞株U937和HL60细胞凋亡的实验研究及机制初探.pdfVIP

中文摘要 穿心莲内酯诱导髓系白血病细胞株U937和HL60细 胞凋亡的实验研究及机制初探 摘 要 目的：恶性肿瘤是危害人类健康最严重的疾病之一。全 世界每年约有700万人死于肿瘤，我国的肿瘤死亡人数也在 百万以上。白血病是造血系统的恶性肿瘤，约占癌肿总发病 率的5％左右。白血病的治疗以化疗为主，其作用是全身性 的，毒副作用大。虽然有骨髓移植、免疫治疗、基因治疗等 治疗手段，但目前药物性化疗仍然是治疗白血病最重要和最 基本的方法。化疗最大的缺点是，化疗药物在杀伤肿瘤细胞 的同时也杀伤正常的组织和细胞，引起严重致死性的并发 症。因此需要寻找新的更有针对性、低毒高效的治疗药物。 现有观点认为中西医结合治疗白血病的疗效优于单纯化疗。 中草药可减轻化疗药的毒副作用，提高机体免疫力，并可用 于难治性急性白血病(AL)的挽救性治疗。 泛兴趣和关注的研究热点。许多天然中草药可以通过干扰肿 瘤细胞生长、代谢、增殖等过程，最终诱导触发肿瘤细胞发 生凋亡。越来越多的资料表明无论是在杀伤肿瘤细胞或抑制 肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞分化、促进凋亡，调整机体免 疫功能，改善症状与体征，还是减轻放化疗毒副作用或对肿 瘤患者的调理，中草药都发挥着重要作用。近半个世纪来人 们越来越关注从传统中草药中提取有效成分用于临床抗肿 瘤治疗。 中文摘要 纯化得到的二萜内酯类单体化合物，在抗病毒、诱导细胞分 化、抗肿瘤及免疫调节等方面均有活性。穿心莲内酯的抗肿 瘤作用机制主要表现为抑制肿瘤细胞增殖、阻滞肿瘤细胞周 期进程并诱导细胞凋亡、提高淋巴细胞抗肿瘤活性等方面。 本实验主要观察穿心莲内酯对白血病细胞株U937和 HL60的体外增殖抑制和诱导凋亡作用，并对其抗肿瘤作用 机制进行初步探讨，为穿心莲内酯作为抗肿瘤药物开发提供 理论依据。 方法： 1采用Cell Counting 2对穿心莲内酯处理过的白血病细胞株U937和HL60 荧光染色，光镜下观察穿心莲内酯作用于细胞后，细胞凋亡 的形态学变化。 3采用流式细胞技术(flow 胞和HL60细胞48小时后，细胞凋亡变化和细胞周期分布的 改变。 4采用逆转录．聚合酶链反应(reverse PCR， transcription mRNA的表达变化。 中文摘要 caspase．3／7活力的变化。 结果： 白血病细胞U937细胞和HL60细胞体外增殖，抑制率呈明 显的浓度依赖性，与对照组比较各组间差异有统计学意义 细胞的抑制率最高，达到83．97％，穿心莲内酯对HL60细胞 增殖抑制作用不及U937细胞明显，但作用48小时最高抑制 80}tmol／L，在此浓度范围内也存在明显的剂量一效应关系，抑 制率分别随着药物浓度增加而增加，与对照组相比具有统计 学意义(Po．05)。 凋亡特征。普通光学显微镜下形态学表现为细胞体积缩小、 染色质聚集、核固缩、核碎裂等；荧光显微镜下表现为凋亡 细胞显示荧光标记，胞核浓集而呈亮蓝色或核呈分叶，碎片 状，边集。 3流式细胞技术检测结果显示，穿心莲内酯可诱导急性 单核细胞性白血病细胞株U937细胞发生Co／Gl期阻滞(由 性粒细胞性白血病细胞株HL60细胞发生S期阻滞(由 中文摘要 种白血病细胞株产生明显的细胞凋亡．以809mol／L穿心莲内 则为17．75％，凋亡不及U937细胞明显。 4．半定量RT-PCR检测结果显示，经不同浓度穿心莲内 mRNA 表达水平随药物作用浓度的增加而降低，与对照组相比差异 有统计学意义(p，o．05)，NF-KBmRNA的表达水平亦随药 物作用浓度的增加而降低，与对照组相比差异具有统计学意 义(尸O．01)。 实验结果显示，穿心莲内酯处理组Caspase．3／7酶活性增加， 与未加药的对照组比较差异具有统计学意义(PO．05)。 结论：穿心莲内酯在一定浓度范围内，能抑制白血病 U937和HL60细胞增殖，具有明