鸡白细胞介素2基因与鸡毒支原体H3株TM1基因的串联及原核表达.pdfVIP

摘 要 为了提高鸡毒支原体DNA疫苗的免疫效果，本研究运用分子克隆技术，获得了 鸡白细胞介素2基因，然后将其与鸡毒支原体H3株TM-1基因进行串联构建了融 合基因，并在原核细胞中进行了表达。 首先，根据GenBank中已登录的鸡白细胞介素2eDNA序列以及原核表达质粒 pET-30a的多克隆位点，自行设计引物，为了便于基因的克隆和表达，我们在引物 的5’端和3’端设计了相应的酶切位点、保护位点、连接臂、起始密码和终止密码。 酸序列测定分析表明，与GenBank中登录的鸡白细胞介素2cDNA序列一致，这表 明已成功克隆了鸡白细胞介素2基因。 其次。运用DNA重组技术将鸡白细胞介素2基因和鸡毒支原体H3株TM一1基 I和HindIII多克隆位点之间，经质粒PCR 因进行串联，插入到pET-30a质粒的EcoR 鉴定、双酶切鉴定和序列测定，结果表明已成功构建了含鸡毒支原体143株TM-1 基因和鸡白细胞介素2基因的融合基因，并将含有此融合基因的重组质粒命名为 pET-30a-TM—l-IL-2。 37℃诱导表达4h后， 最后，将此重组质粒转化E．coliBL21(DE3)菌株。经IPTG 体形式存在。表达产物在尿素存在下经超声波处理，获得了纯化的融合蛋白。这为 为进一步研究鸡白细胞介素2及鸡毒支原体的生物学活性奠定了基础。 综上所述，本研究成功地构建了含鸡毒支原体H3株TM一1基因和鸡白细胞介 素2基因的重组表达质粒，并将其导入原核细胞进行了表达。这为进一步研究鸡毒支 原体DNA疫苗奠定了实验基础。 关键词：鸡毒支原体；白细胞介素2；融合基因；原核表达 CascadeConnectionand ofChIL一2Gene ProkaryoticExpression and H3 StrainTM一1Gene MycoplasmaGallisepticum Abstract InordertofurtherresearchDNAvaccineofMGand its in improveefficiency immune clonedchickenIL-2 meansofthe response，we geneby genemanipulation andconstructedrecombinant TM·-1·-IL·-2fusion technology plasmidcontaining werewell in cells． gene．Thesegenes expressedprokaryoticexpression tothe eDNA ChIL一2 inGenBankand Firstly，according sequenceregistered multi-clonerestrictionsitesof enzyme prokaryoticexpression plasmidpET一30a(+)，we one of fortheChIL一2To