HPLC的使用与维护.ppt

液相色谱分离原理及分类 LC分离系统由固定相和流动相组成。其固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。 色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶剂（即流动相或洗脱液）以及固定相分子间的作用，作用力的大小，决定色谱过程的保留行为。 根据分离机制不同，液相色谱可分为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。 液相色谱流程 首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到 液相色谱图。 2.进样器 六通阀使用和维护注意事项： ①样品溶液进样前必须用0.45μ m滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。 ②转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力；再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。 ③为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。 柱的使用和维护注意事项 柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动； 当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净； 要注意流动相的脱气； 避免使用高粘度的溶剂作为流动相； 进样样品要提纯； 严格控制进样量； 每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品； 每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱； 若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭. 液相色谱流动相 1. 流动相特性 （1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况； （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。 （3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 * All HPLC detectors, regardless of design should provide the functions outlined here. * A prefect detector design would provide all of the listed features. Unfortunately, no such detector exists and any detector design is forced to make compromises. As we will see throughout the presentation, knowledge of these compromises and the effects of the obtained results allow users to use detectors for their maximum benefit. HPLC的使用与维护 基本原理和特点 液相色谱仪器部件 日常维护 基本原理和特点 基本原理：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与 固定相(stationary phase)发生作用(吸附,分配,离子吸引,排阻,亲和)的大小,强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出. 特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动化。 一些商品化仪器 脱气装置 四元泵 检测器 柱温箱 样品盘 控温箱 流动相 高效液相色谱仪组成 输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 数据记录处理系统 高效液相色谱仪组成 1.输液泵 输液泵是HPLC 系统中最重要的部件之一。泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和分析结果的可靠性。 输液泵应具备如下性能： ①流量稳定，其RSD 应＜0.5%，这对定性定量的准确性至关重要；②流量范围宽，分析型应在0.1~10 ml/min 范围内连续可调，制 备型应能达到100 ml/min； ③输出压力高，一般应能达到150~300kg/cm2； ④液缸容积小； ⑤密封性能好，耐腐蚀。 泵的保养： 防止任何固体微粒进入泵体，使用流动相需经0.45μ m或0.2μ m滤膜过滤，输液泵的滤器应经常清洗或更换； 流动相不应含有任何腐蚀性物质，进样完成后，必须泵入纯水将泵充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（对于