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5．细菌学检查 目的在于延长和保证精子的保存时间，防止母兽生殖道感染。 污染可能： 生殖道疾病 包皮中污染 采精器械消毒不严 保存期间污染 第五章 精液的稀释 1 、 稀释液的主要成分和作用 稀释可以是糖类、 奶类、卵黄 、化学物质 、抗菌素和酶类等.将其按一定数量或比例配合,对精子在体外应有益无害,能延长保存时间,或在冷冻过程中保护精子免受冻害提高冷冻后精子的存活力. 水是溶解各种营养物质和保护物的溶剂,主要用以扩大精液容量 营养物葡萄糖果糖乳糖蔗糖等各种糖类,以及牛奶奶粉卵黄等,可补充精子在体外代谢过程中消耗的能源,延长精子寿命. 保护物质主要是保护精子免受各种不良外界环境因素的危害. 柠檬酸钠磷酸二晴钾等缓冲物质能保持精液适当的pH,对精子的代谢酸中毒和酶活动反应有良好的缓冲作用 各种糖类甘氨酸等弱酸电解质具有降低精请中电解质浓度的作用. 奶类卵黄甘油二甲基亚砜和三羟甲基氨基甲烷等具有防止精子冷休克抗冷冻危害的作用. 青霉素链霉素等,具有抗菌作用,可以抑制细菌和病原微生物的繁殖,有利于延长精子在体外存活时间. 其他天添加物质为了改善精子所处环境的理化特征以及母畜生殖道的生理机能,提高受精力,促进合子的发育,常在精液中添加酶类激素类维生素类等. 2 、精液的稀释方法和倍数 先将稀释液放置30左右的水浴锅或恒温箱中.精液经检查后迅速将稀释液沿杯(瓶)壁缓缓加入精液中,然后轻轻摇动使之混合均匀.稀释后的精液应做活力检查. 决定精液稀释倍数的主要依据是由精液检查后的活力、密度及输精量与输入母畜生殖道要求的有效精子数来决定的.牛的冷冻精液一个输精剂量有效活精子数不少于1000万,羊液态精液不少于7000万,冷冻精液不少于3000万.牛冷冻精液颗粒稀释倍数为1:4~5,细管为1:20,羊的液态精液为1:5~8,冷冻精液为1:5~8. 第六章 精液的液态保存 1、常温保存(15~25 ℃) 2 、 低温保存(0~5 ℃):在羊的人工授精中,重要采用3~5 ℃低温液态保存法,一般放在冰箱内保存,在这种条件下,精子的运动完全消失而处于暂时的不活动状态,代谢水平降低,因而精子保存的时间相对延长. 低温保存液: A.二水柠檬酸纳2.8g,+葡萄糖0.8,+蒸馏水100 ml,取其80mg +卵黄20 ml 、 青霉素1000单位/ml 、链霉素1000mg /ml . B.二水柠檬酸纳27g +氨基乙酸0.36g ,+蒸馏水100 ml ,加青霉素1000单位/ml \链霉素1000mg /ml 第七章 精液的冷冻保存 优点精液冷冻保存的成功是人工受精技术史上的一项重大革命,它解决了精液长期保存的问题,使精液的应用不受时间\地域和种畜生命的限制.最大限度的提高了优良种公畜的利用率.加速了品种的改良. 一、精液冷冻的机理 精子在冷冻状态下它的代谢基本停止,活动完全消失,但并未死亡,生命以静止状态下保存下来.因此,从理论上讲冷冻精液的保存时间是无限的.但精液在冷冻过程中,也不可避免地对精子会造成一些损害,所以,冷冻保存精液,一方面要设法完全抑制精子代谢,但又不能破坏精子的完整性.然而,目前的冷冻保存技术只有部分精子能够经受冷冻,升温后可以复活.而部分精子在冷冻解冻过程中死亡. 目前, 对于精液冷冻的机理问题,集中了玻璃态 学说和微晶学说.目前,冷冻精液所用的速度一般较快,但可能仍不足于以形成玻璃态,有人认为,对细胞的冷冻保护并不一定需要完全的玻璃态,在一般的条件下冷冻不可避免地要形成冰晶,,冷冻成败的键关取决于冰晶的大小,只要避免对生物细胞族以造成伤害的大晶体形成,并稳定在微晶状态,将能使细胞基本上得到保护. 1 、 玻璃态 学说:水的结晶只有当温度在冰点以下的一定范围内,即0 ℃ ~ -60 ℃才能形成,如低于该范围,则不会形成冰晶,而形成均质的团快 --即玻璃化。在降温过程中,要想让水不形成冰晶,而直接形成玻璃化状态,必须以100~200 ℃ /秒的速率快速通过并达-130 ℃以下,目前冷冻精液的降温速度远比此降温速度慢得多. — 玻璃态是一种非结晶固态,它具有以下特点: 分子不按照一定结构排列 不发生剧烈的运动 不放出结晶热和溶解热 溶液的溶质浓度不发生变化 从以上的论点来看,玻璃化状态 更接近于液态,它与晶体\固态不大相同.是一种十分理想的保存生物组织和细胞并使其免受冻害的固态形式. 2 、 微晶学说:目前的冷冻方法,可能用稀释液的保护作用及快速降温等措施,在冷冻溶液中先形成大量的晶核,为构成微竟晶打下基础,此时若加强散热,避免温度回升,水分子将沿着 各个晶核界面形成很小的冰晶—微晶. 微晶是一种极不稳定的晶态,它的总面积大大超过晶体,微晶没有同邻近的水分子构成氢键,界面的水分子有较高的