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pH 值对赖氨酸保护作用影响的研究1 1、2 2 2 2 贺洪 ，刘慧敏 ，朱泽瑞 ，印大中 1 湖南师范大学体育学院，湖南长沙（410012 ） 2 湖南师范大学生命科学学院，湖南长沙（410081 ） 摘 要: 用紫外吸收研究力竭运动后大鼠血清中赖氨酸（lysine ）对丙二醛（MDA ）的清除。 通过试管反应发现，在适宜的浓度和pH 值下，赖氨酸能与MDA 结合形成类似尿液的成分； 乳酸升高所营造的微酸性环境能促使这一反应的进行。提示：剧烈运动前后适时适量饮用赖 氨酸能抵抗氧应激代谢产物的生物毒性作用，保护机体免受伤害。 关键词：赖氨酸，丙二醛，运动保护 脂质过氧化中间产物 MDA 、HNE （4-羟基壬烯醛）等不饱和醛酮具有生物活性，能与 含氮生物分子发生交联，使动物组织硬化，造成伤害[1-6] 。所以 MDA 的代谢途径早就成为 科学家们研究的热点。在小鼠和人类的尿液中寻找 MDA 的分泌物，发现MDA 在尿液中主 [7] 要是以与赖氨酸结合的两种物质的形式—N-ε-2-丙烯醛赖氨酸和 N-α-乙酰酯存在 。这就表 明在体内MDA 主要是作用于蛋白质中的赖氨酸残基。本文采用体外试管实验考察赖氨酸和 MDA 的反应产物以及pH 值对反应速率的影响。 1. 材料和方法 1.1 试剂 超纯水，由 Milli －Q 系统纯化（Millipore China Limited), 电导率≧18.2MΩ.cm；盐酸赖 氨酸购于长沙瑞晶生物经营部；TMP 购于 sigma 公司；其他均为常规试剂。 1.2 试剂的配制 1.2.1 磷酸缓冲液（PBS ） 取 0.2 mol/L Na HPO .12H O 和 0.2 mol/L NaH PO .2H O1 配制 2 4 2 2 4 2 pH7.4 、7.2、7.0、6.8 的PBS 缓冲液。 1.2.2 16 mmol/L 赖氨酸 称取四份赖氨酸 0.2952 g，于少量超纯水中溶解，用 6 mol/L NaOH 调节 pH 值至 7.4、7.2、7.0、6.8。以相应pH 值的 PBS 溶液定容至 100 ml。 1.2.3 1 mmol/L MDA[8] 用四个 50 mL 容量瓶分别加 1 mol /L HCl 2 mL，再加 0.00845 mL TMP，于40 ℃水浴溶解，精确计时 2.5 min 后取出，分别用 6 mol/L 的NaOH 调 pH 至 7.4、 7.2、7.0、6.8 。最后用相应pH 值的 PBS 溶液定容至 50 mL。 1.3 仪器设备 PT 电动跑台（浙江省杭州立泰科技有限公司）；Lambda Bio45 紫外分光光度仪（美国 Perkin Elmer 公司）；D －37520 型高速冷冻离心机（德国 Heraeus Biofuge 公司）；Molli-Q Academic A 10 超纯水系统（Millipore China Limited ）；Mettler Toledo A E200 分析天平（上 海梅特勒—托利多有限公司）。 1.4 MDA 和赖氨酸的试管反应 1.4.1 测定赖氨酸、MDA 、力竭大鼠尿液和赖氨酸与MDA 反应产物的紫外吸收光谱图 将 1 mmol/L 的赖氨酸、0.01 mmol/L 的MDA 、即刻取得的力竭大鼠的尿液、16 mmol/L 的赖氨 1本课题得到湖南师范大学体育学院课题经费资助（课题号：JS0603 ） -1- 酸与 1 mmol/L 的MDA 在 6 h 的反应产物分别测定吸光值。 1.4.2