形成一个细菌菌落.PPT

绪论 生物技术也叫生物工程 微生物基础知识 细菌的构造 细菌细胞由外向里依次有鞭毛、菌毛、荚膜、细胞壁、细胞膜、细胞质，细胞质中又有液泡、储存性颗粒、核质等。 *细胞壁 结构特点：坚韧且有弹性 细胞壁有哪些功能？ ①固定细胞外形； 菌落： 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。 资料: 　　大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli） 革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1～3微米。周身鞭毛，能运动，无芽孢。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生素B和K，以及有杀菌作用的大肠杆菌素。正常栖居条件下不致病。但若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在肠道中大量繁殖，几占粪便干重的1/3。兼性厌氧菌。 实验一:大肠杆菌的培养和分离一、实验目的: 1.进行大肠杆菌的扩增,利用液体培养基进行细菌培养的操作。 2. 进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。 3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理 二、实验原理: 大肠杆菌的新陈代谢是异养兼性厌氧型，在生态系统的身份（消费者、分解者），因此可以用LB液体培养基（通用的细菌培养基或普通的细菌培养基）扩大培养。培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，分离后，培养基上会形成一个个单独的菌落，便于观察鉴定。这种方法有利于消除污染杂菌，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。 实验步骤： 配置培养基 固体培养基 （加琼脂） 用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定等 3、半固体培养基 观察微生物的动力，有时用来保藏菌种。 ４、选择培养基 在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的培养基，称之为选择培养基。 ５、鉴别培养基 　　伊红美蓝琼脂培养基是一种鉴别培养基。常用于检查乳制品和饮用水中是否含有致病性的肠道细菌。培养基中的伊红为酸性染料，美蓝则为碱性染料。当大肠杆菌发酵乳糖产生混合酸时，细菌带正电荷，与伊红染色，再与美蓝结合生成紫黑色化合物。在此培养基上生长的大肠杆菌形成呈紫黑色带金属光泽的小菌落。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。不能发酵乳糖的细菌产碱性物较多，带负电荷，与美蓝结合，被染成蓝色菌落。 三、实验操作要求： 1.培养基的配比与制作 　原理:培养基是微生物的生存环境和营养物质,必须无菌。俗话说，“细菌喜荤，霉菌喜素” 　细菌培养基通常要用蛋白胨和酵母提取物配制,加入一定的氯化钠（维持一定的渗透压）。 　霉菌培养一般用无机盐配置或添加蔗糖的豆芽汁． 　 细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长 　霉菌要求在中偏酸的环境中生长 　所以在配制培养基时需调节培养基的酸碱度。 　　　 （一）培养基的营养组成 　　不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐、等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质． 　例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 6.加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞.棉塞塞入试管或三角瓶口后周围没有皱褶和缝隙，容易拔出，手提棉塞不能落下.最好用封口膜取代棉塞 消毒和灭菌的区别 8．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. 接种操作示意图 灼烧接种后要冷却后才能伸入菌液、以免温度太高杀死菌种。 划线最后一区域不能与第一区域相连。 划线力度要合适，防止用力过大刺破培养基。 二.无菌技术(灭菌操作): 在培养微生物时必须进行无菌操作。 （1）各种器皿必须是无菌的，如各种大小的培养皿、试管等等通常用高压蒸汽灭菌法灭菌（自主学习：P20-21）。 （2）各种培养基也必须是无菌的。如加入培养基的三角瓶、试管也要在1210 C 下灭菌15min（自主学习：P21 ）。 （3）在操作过程中必须是无菌的（菌转移操作必须是无菌的）。在将培养基加入到三角瓶、试管和培养皿中时，三角瓶口、试管口、和培养皿壁上不能沾有培养基，否则容易发生污染（自主学习：P21 ） 下表是甲同学为培养植物离体组织、动物细胞和细菌而分别提供的三组培养基： 1、其中2组培养基有缺陷，请做修改：（正确的不修改，空格内填正确） ①用a组培养基培养植物离体组织，必需添加有关 ②用b组培养基培养动物细胞，不要添加 ； ③用c组培养基检验硬币上是否有细