124微生物限检查法标准操作规程.doc

* * * * 制 药 厂 操作标准----质量管理 文件名称 微生物限度检查法 标准操作规程 编 码 SOP-QC-124-00 页 数 34-1 实施日期 制 订 人 审 核 人 批准人 制订日期 审核日期 批准日期 制订部门 质管部 分发部门 检验室 目　　的：制订微生物限度检查法的标准操作规程。 适用范围：微生物限度检查。 责　　任：微生物限度检查操作人员按本规程操作，检验室主任监督本规程的实施。 程　　序： 1.简述 细菌、霉菌、酵母菌计数是检测规定企业单位内的非灭菌制剂污染的活菌数量，是判定药品受到微生物污染程度的重要指标，也是对生产企业的药品、原料、辅料、设备器具、工艺流程、生产环境和操作者的卫生状况进行卫生学评价的综合依据之一。 　　细菌、霉菌、酵母菌计数均采用平板菌落计数法，这是活菌计数方法之一，也是目前国际上许多国家常用的一种方法。 　　该方法以在琼脂平板上，每个细菌（营养琼脂）、霉菌（玫瑰红钠琼脂）、酵母菌（玫瑰红钠琼脂或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂）形成一个独立可见的菌落为计数依据。测定结果只反映在规定条件下所生长的细菌（一群在营养琼脂上发育的嗜中温、需氧和兼性厌氧菌）、霉菌和酵母菌的菌落数。不包括对营养、氧气、温度、pH和其他因素有特殊要求的细菌、霉菌和酵母菌。 　　一个细菌、霉菌和酵母菌菌落均可由一个或多个菌细胞形成。因此供试品中所测的菌落数实际为菌落形成单位数（colony forming unitg，CFU），而不应理解为细菌、霉菌、酵母菌的个数。 　　在进行本法测定时，必须严格按本法所规定的条件操作，以免产生实验误差。 2.设备、仪器及用具 2.1设备 * * * * 制 药 厂 操作标准----质量管理 文件名称 微生物限度检查法 标准操作规程 编 码 SOP-QC-107-00 页 数 34-2 2.1.1无菌室 2.1.1.1结构和要求　无菌室应采光良好、避免潮湿、无离厕所及污染区（面积不超过10m2，高度不超过2.4m）由缓冲间（2个）、操作间组成。 　　操作间与缓冲间之间应有样品传递箱，出入操作间和缓冲间的门不应直对。 　　无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墙与地面及墙壁、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。操作间内不应安装下水道。 　　无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300勒克斯。缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯（2～2.5W/m3），紫外杀菌灯距实验台面高度不超过1m，并应定期检查辐射强度，不得低于70μW.cm-2（1m距离）。不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。 2.1.1.2温度、湿度　无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外杀菌灯杀菌效果，故温度应控制在18～26℃，相对湿度40～60%。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压、不低于4.9Pa。 2.1.1.3操作间，操作间应安装空气除菌过滤层流装置。洁净度不应低于10000级，局部净化度为100级，或放置同等级净化工作台，并准备药物天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉，大、小橡皮乳头等。 2.1.1.4缓冲间 缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不应放置培养箱和其他杂物。 2.1.1.5洁净级别及检查方法 通常采用尘粒数及浮游菌数或沉降菌数测定法。 洁净级别 尘粒数/m3 活微生数（个）/m3 ≥0.5　　　　 ≥5 100级 ≤3，500 ≤0 ≤5 10000级 ≤350，000 ≤2000 ≤100 100000级 （GB/T16294－1996） ≤3，500，000 ≤20，000 ≤500 * * * * 制 药 厂 操作标准----质量管理 文件名称 微生物限度检查法 标准操作规程 编 码 SOP-QC-107-00 页 数 34-3 洁净级别 个/（90mm.0.5h） 1 1000级 ≤3 100000级 ≤10 2.1.1.5.1浮游菌数测试方法（参照中华人民共和国国家标准GB/T16293-1996） 2.1.1.5.2沉降菌数测定（Ⅱ法） 无菌室操作台消毒擦拭处理后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30～35C预培养48h，证明无菌落生长）。以无菌方式（或经传递箱）移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min后将盖盖上。在30～35℃培养箱内倒置培养48h，取出检查。3个平板生长的平均菌落数不超过1个。 无菌操作台或净化工作台要定期检测其洁净度，应达到100级。净化工作台中的高效及中效过滤器应根据检测情况，必要时予以更换处理。 2.1.1.6消毒处理 无菌室应在每次操作前、后均用0.1％苯扎溴铵