赤峰市及周边地区丙肝病毒基因型调查分析.docVIP

精品论文 参考文献 赤峰市及周边地区丙肝病毒基因型调查分析 张慧敏 陈丽群 　　（赤峰市传染病防治医院 内蒙古 赤峰 024000） 　　【摘要】 目的：研究赤峰市及周边地区丙型肝炎病毒 (HCV)基因型的流行病学特点。方法：采用INNO LIPA反向线形探针杂交法,对来自赤峰市及周别地区719例慢性丙型肝炎患者进行了HCV基因型调查。结果：719例患者中丙肝基因型分布如下：1b型359例，2a型347例，2i型6例，3a型2例，3b型2例，1a型2例，2r型1例。结论：静脉药瘾或毒品注射是赤峰市及周边地区丙型肝炎的重要传播途径。 　　【关键词】 肝炎病毒；丙型；基因型；感染控制 　　【中图分类号】R18 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）15-0388-02 　　在我国,丙型肝炎病毒(HCV)是肝病的重要致病源,由于HCV的复制所依赖的多聚酶缺乏校对功能,加上为适应环境逃避宿主免疫监视作用易发生突变,在长期的演化过程中产生了许多基因变异株[1]。从1989年Choo等首次克隆丙型肝炎病毒(HCV)以来,世界已对数十株HCV进行了克隆和测序,发现HCV变异较大,存在多种基因型。HCV不同基因型与HCV感染的地区分布、临床表现、预后及对干扰素等抗病毒药物治疗的反应可能具有某种相关性[2]。因此对不同地区的HCV基因型进行深入研究具有其实用价值。 　　1.材料与方法 　　1.1 调查对象 　　收集2011年11月至2015年12月在我院就诊的门诊及住院丙型肝炎患者共719例，按 1995 年第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准 其中男：415例，女304例，年龄分组中25岁以下3例，26～35岁28例，36～45岁85例，46～55岁230例，56～65岁298例，65岁以上75例。输血史35例（4.86%），毒品注射史346例（48.10%），纹身4例（0.56%），穿耳孔3例（0.40%），手术史91例（12.65%），拔牙32例（4.45%），感染途径不详208例（28.98%） 　　1.2 仪器与试剂 　　病毒RNA纯化试剂盒（艾康生物），RrvetTta Ace qPCR RT Kit(TOYOBO),dNTP(10mM)、Mgcl2(25mM)、Ex Taq(5U/mu;l)、DL2000Matktt、1%TAE、6%Loading Buffer等均由TAKARA公司提供，GeIRed由Bictamn提供，琼脂糖由BIOWEST提供。普通低速离心机（Anke TDLSO-2B）,漩涡震荡仪（VWR Mittivertecer）,高速冷冻离心机（Sigms JK15）,生物安全柜（Biotise）。 　　1.3 方法 　　(1)逆转录及第一次 PCR扩增:提取的 RNA加入 AMV - RT5U、RNasin20U、Taq酶 2U、2mMdNTP3mu;l, 10x AMV- RT缓冲液3mu;l。型共同性引物 P1及P2终浓度分别为0.8mu;mol/L,总体积 30mu;l。42℃逆转录 20min后接第 1次扩增 ,反应条件为 94℃ 60minrarr; 55℃ 90minrarr; 72℃ 120min,35个循环。(2)第 2次 PCR扩增: 第1次PCR扩增产物5mu;l加入10times;AMV- RT 缓冲液3mu;l、2mMdN TP3mu;l、 Taq酶2U。型特异性引物 P 3 及 P 4,5,6,7 终浓度分别为0. 8mu;mol/L,总体积 30mu;l。反应条件为94℃ 60minrarr; 60℃ 60minrarr;72℃ 90min, 30个循环, 72℃延伸 5min。每次扩增均设HCV RN A阳性血清对照和阴性对照 (未加模板 )。(3)第 2次 PCR扩增产物 10mu;l在 6%聚丙烯酰胺凝胶上电泳,溴乙锭染色后在紫外灯下观察橙红荧光带,判断结果。HCV-Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 型的扩增产物长度分别为 57bp、144bp、174bp及123bp。 　　2.结果 　　2.1 丙型肝炎病人HCV基因分型结果 　　719例患者中丙肝基因型分布如下：1b型359例，2a型347例，2i型6例，3a型2例，3b型2例，1a型2例，2r型1例。 　　2.2　丙型肝炎及病人HCV基因分型结果 (见附表) 　　各组基因分型构成比经chi;2检验无显著性差异,Pgt;0.05。719例丙肝病人中52.96%（381/719).具有静脉药瘾或毒品注射、输血或使用血制品的历史。 　　表 丙型肝炎中 HCV基因型别分布 * 　　3.讨论 　　随着分子生物学、免疫学技