罗格列酮对髂动脉球囊损伤兔血管内皮的保护作用PPT.ppt

* 罗格列酮对髂动脉球囊损伤兔血管内皮的保护作用 广州军区武汉总医院心内科 丁世芳 曹选超 卢青 研究背景 经皮冠状动脉腔内成形术（percutaneous transluminal coronary angioplasty，PTCA） SMC过度增殖迁移 血管内皮损伤 血管负性重塑 炎症细胞激活 血管弹性回缩 血栓形成、机化 再狭窄 影响PTCA术后再狭窄重要因素 血管内皮损伤 平滑肌细胞的过度增殖、迁移 脂肪组织：内分泌器官？ 分泌多种物质，如纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、瘦素、肿瘤坏死因子-a、抵抗素及脂联素(adiponectin，APN)等 改善胰岛素抵抗、调节脂肪代谢、防止动脉粥样硬化等方面有着重要作用 脂联素也被称为apM1、Acrp30或AdipoQ，是一种脂肪细胞特异的细胞因子 改善2型糖尿病患者的胰岛素抵抗、改善高胰岛素血症和高糖血症代谢紊乱 调节脂质代谢紊乱 抑制过度的炎症反应 抗动脉粥样硬化 肾脏保护作用 研究目的 罗格列酮 (ROS) 脂联素 (APN) 内膜增殖 再狭窄 （RS） 实验设计 罗格列酮对髂动脉球囊损伤兔血管内皮的保护作用 随机分组 模型制备 血清学指标 病理形态学 研究内容 1. 实验动物及分组 手术对照组 1 仅行右侧股动脉结扎术，普通饮食喂养 2 高脂饮食喂养8周后，行右侧髂动脉球囊内膜剥脱术 模型组 3 高脂饮食8周 +右侧髂动脉球囊内膜剥脱术+术前3天罗格列酮（2mg 1/日） 罗格列酮组 2. 兔腹-髂动脉血管内膜损伤模型制作 麻醉—速麻安肌肉注射 右侧膝上大腿内侧股动脉搏动最明显处纵行切开皮肤，钝性分离皮下组织及肌肉 股动脉、股静脉、股神经游离完毕 股动脉远端结扎，近端用无创血管夹暂时夹闭阻断血流 用眼科剪在结扎动脉上方作一个45度切口，直接插入冠脉球囊导管，深度约12-15cm，达髂动脉分叉水平 以6～8个大气压充盈动脉球囊，将充气球囊沿髂动脉上下牵拉5-8cm至股动脉近端，反复3次，充分剥离髂动脉内膜 术后以医用活力碘消毒手术伤口，肌注青霉素80万单位抗感染，连续3天 模型制备所用的球囊和压力泵 3. 血生化标本的采集和测定 于实验初和术后1、4周末采测血糖（FPG）、总胆固醇(TC)、甘油三酯 (TG)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C)、 低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C)和超敏C反应蛋白（hs-CRP）的含量 ELISA法测定血浆中脂联素的表达水平 4. 病理形态学观察 术后1、4周末处死各组动物，游离腹主动脉并逆行分离至髂总动脉和股动脉，以左、右髂动脉分叉点为参照，依次留取病理标本各1～2 cm，固定切片，分组编号 HE染色及弹力纤维染色观察受损血管组织形态学改变，利用图像分析软件，进行新生内膜面积、中膜面积及内膜增殖指数等分析 5. 免疫组化及细胞凋亡检测 免疫组化（ SABC法） 烤片，脱蜡，水化 → 封闭内源性过氧化物酶 → 热修复抗原 → BSA封闭 →滴加一抗 →滴加二抗 →滴加SABC → DAB显色 →苏木素复染→脱水，透明，封固 阳性表达分析：每份标本分别选取5个高倍视野（×400倍），染色完成后在光镜下观察结果，以细胞浆内棕黄色粗大颗粒为阳性。 HPAIS 1000高清晰度彩色病理图像分析系统采集图像， Image-Pro Plus version 6.0软件对图像进行分析。 细胞凋亡检测（TUNEL法） * 烤片，脱蜡，水化 → 封闭内源性过氧化物酶 → 蛋白酶消化 → 标记缓冲液 →滴加生物素化地高辛抗体 →滴加SABC → DAB显色 →苏木素复染→脱水，透明，封固 阳性表达分析：每份标本分别选取5个高倍视野（×400倍），染色完成后在光镜下观察结果，细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞。 计算细胞凋亡的阳性率=（阳性细胞数/观察细胞总数）×100% 6. 统计分析 以SPSS 13.0统计软件包进行分析，计量资料用均数±标准差表示，两组资料间的比较采用t检验，多组间差异的显著性比较用方差分析，P0.05有统计学意义 制表、摄片描述实验结果 组别 时间 FPG TC TG HDL-C LDL-C 正常对照组 0 8.44±0.40 1.43±0.09 0.73±0.13 0.91±0.14 0.71±0.08 1 8.29±0.34 1.37±0.63 0.69±0.13 0.86±0.16 0.68±0.34 4 8.26±0.45 1.41±0.29 0.7