酮康唑乳膏微生物限度检查方法的建立.docVIP

精品论文 参考文献 酮康唑乳膏微生物限度检查方法的建立 （泰州市食品药品检验所 江苏泰州 225300） 　　【摘要】目的：探索酮康唑乳膏微生物限度检验方法。方法：按《中国药典》2010年版附录检验。结果：酮康唑乳膏酵母菌检查采用薄膜过滤法回收率达到70％以上。结论：该方法可用于酮康唑乳膏微生物限度检查。 　　【关键词】酮康唑乳膏；微生物限度检查；验证 　　【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）26-0271-03 　　酮康唑乳膏用于手癣、足癣、体癣、股癣、花斑癣以及皮肤念珠菌病。处方组成为酮康唑20毫克。辅料为：丙二醇、十四酸异丙酯、十六醇、十八醇、失水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨酯60、聚山梨酯80、无水亚硫酸钠和纯化水。本品对皮真菌和（或）酵母菌有一定的抑制作用。本文通过对酮康唑乳膏微生物限度检查方法的验证[2]，探索其微生物限度检查方法。 　　1.材料 　　1.1 培养基 　　营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基、改良马丁琼脂培养基、液体改良马丁、十六烷三甲基溴化铵培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基。购自北京陆桥技术股份有限公司。 　　1.2 稀释液 　　pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。 　　1.3 样品 　　酮康唑乳膏，规格250ml，批号090801、090802、090803 　　1.4 菌种 　　枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、大肠埃希菌CMCC（B）44102、白色念珠菌CMCC (F) 98001、黑曲霉CMCC(F)98003、铜绿假单孢菌CMCC(F)10104。以上菌种均购自江苏省药品检验所，为第三代传代品种。 　　1.5 仪器设备 　　净化工作台、恒温培养箱（30～35℃）、生化培养箱（25～28℃）、微波炉、康氏振荡仪、匀浆仪（300～8000r/min）、恒温水浴、电热干燥箱（250～350℃）、电冰箱、空调、高度蒸汽灭菌器、集菌仪、离心器、菌落汁数器、显微镜（1500x）、电子天平（感量0.1g）、免接触自动控制手消毒器 　　1.6 玻璃器皿 　　锥形瓶（250～300ml）、平皿（9cm）、量筒（100m）、试管（18times;180mm）及塞、吸管（1ml分度0.01，10ml分度0.1）、注射器（20或30ml）、注射针头、载玻片、可折卸滤器及微孔滤膜（0.45mu;m）均于160℃干热灭菌2h或高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干备用 　　1.7 用具 　　一次性无菌衣、帽、口罩、手套、大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并定期用70%～75%，乙醇溶液浸泡）、接种环（白铱金、环径4～5mm、长度6～10cm）、乙醇灯、乙醇棉球及碘伏棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、打火机、记号笔、白瓷盘、研钵（陶瓷制、直径10～12cm）、洗手盆、实验记录纸等。 　　2.方法 　　2.1 菌落计数方法的验证 　　2.1.1供试液制备：取样品10mL，加稀释液至100mL，混匀，作为1：10供试液。 　　2.1.2菌液制备 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌新鲜培养物至营养肉汤培养基中，培养18～24小时；接种白色念珠菌新鲜培养物于改良马丁培养基，培养24～48小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（v/v）的聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（v/v）的聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。 　　2.2 常规法 　　2.2.1试验组 取1:10的供试液1.0ml、0.5ml、0.2ml及1ml含50～100cfu试验菌菌悬液（大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉）分别注入平皿中，立即倾注营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基分别置于30～35℃培养72小时、23～28℃培120小时。每株试验菌平行制备两个平皿。 　　2.2.2菌液组 每皿注入1ml试验菌，测定其菌数，每株试验菌平行制备两个平皿。 　　2.2.3供试品对照组 取1:10的供试液1.0ml、0.5ml、0.2ml置平皿中，立即顷注营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基，测定本底菌数。平行制备两个平皿。结果见下表1。 　　表1 酮康唑乳膏-常规法(回收率) 　　 　　由表1可看上述方法表明金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的回收率