酸枣仁-黄连水煎剂对PCPA致失眠模型小鼠的GABA和5-HT的影响.docVIP

精品论文 参考文献 酸枣仁-黄连水煎剂对PCPA致失眠模型小鼠的GABA和5-HT的影响 广东省湛江市第二人民医院 广东湛江 524003 【摘要】目的：进一步探讨联合酸枣仁和黄连水煎剂应用于对氯苯丙氨酸（PCPA）致失眠模型小鼠的作用机理。方法：将40只SPF级健康的昆明雌性小鼠随机分为4组，每组10只：空白对照组（给予生理盐水），模型对照组（给予生理盐水），天王补心混悬液组（阳性组，给予1.5 g/kg，灌胃给药），酸枣仁-黄连水煎剂组（给药组，给予 5 g/kg，灌胃给药)。除空白对照组外，其余3组小鼠均腹腔注射PCPA混悬液300 mg/kg，每隔一天腹腔注射1次，共注射2次。待给药结束后，在冰上迅速取出各组小鼠的脑组织，接着通过酶联免疫吸附试验法（Elisa）检测各组小鼠脑组织5-羟色胺（5-HT）和gamma;-氨基丁酸（GABA）的含量。结果：与模型组比较，天王补心混悬液组和酸枣仁-黄连水煎剂组的5-HT含量显著升高（P=0.000017；P=0.000009），然而，GABA含量显著降低（P=0.00057；P=0.00075），差异均有统计学意义，此外，天王补心混悬液组和酸枣仁-黄连水煎剂组的5-HT和GABA含量均无显著性差异，均与空白对照组相差不大。结论：酸枣仁和黄连联合水煎剂应用于治疗PCPA致失眠模型小鼠的机制可能是与升高脑组织中的5-HT和降低GABA的水平有关。 【关键词】酸枣仁；黄连；联合应用；PCPA致失眠模型小鼠；酸枣仁-黄连水煎剂 【中图分类号】R285.5 【文献标识码】A 【文章编号】2096-0867（2016）12-037-02 失眠是指无法入睡或无法保持睡眠状态,导致睡眠不足。由于社会节奏的加快和工作压力的不断增大，失眠已成为困扰人们生活的严重疾病。中药酸枣仁或黄连都具有独特镇静催眠作用，无毒副作用，常被应用于临床治疗神经衰弱和失眠[1]。研究发现酸枣仁提取物和乙醇提取物能明显缩短小鼠的入睡时间，显著延长睡眠持续时间，表明酸枣仁提取物能明显改善小鼠的睡眠[2]。黄连可能通过抑制下丘脑-垂体-肾上腺素轴（HPA），增加对氯苯丙氨酸（PCPA）小鼠失眠模型下丘脑中5-羟色胺（5-HT）和去甲肾上腺素（NE）的含量，来发挥一定的镇静、催眠的作用[1]。另一研究表明黄连阿胶汤治疗失眠症的作用与5-HT关系明显，而与gamma;-氨基丁酸（GABA）关系不明显，即其治疗失眠的机制可能与5-HT的含量有关[3]。而至于将其两者联合的酸枣仁和黄连水煎剂对失眠的作用机制仍不清楚。因此，本实验为了进一步明确酸枣仁和黄连联合应用于失眠的作用机理，我们检测了其联用后对PCPA致失眠小鼠的脑组织中5-HT和GABA含量的影响。 1 材料与仪器 1.1 动物 SPF级健康雌性昆明小鼠40只，体重（18-22g），由广东省实验动物监测所提供，实验动物生产许可证号SCXK（粤）2008-0020。实验前先将动物适应性饲养3d，自由饮水、进食标准小鼠饲料；动物房内适度通风，光照12h，室温25℃，温度55%plusmn;5%。 1.2 药物与试剂 酸枣仁和黄连均购自湛江市第二中医院；天王补心丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂生产，浓缩丸，批号。对氯苯丙氨酸（Sigma）；5-HT、和GABA酶联免疫吸附(Elisa)测定试剂盒(北京诚林生物科技有限公司提供)；DHL-A(3+1)型北京东华原十功能煎药机(北京东华原医疗设备有限公司)；Multiskan352型MS酶标仪(芬兰LABSYSTEM公司)。 2 方法 2.1 试药制备 精确称取酸枣仁、黄连各30 g，加水15倍量，浸泡30 min后，二煎加水13倍量，煎煮20 min，4层纱布分别过滤，合并两次水煎液，浓缩至生药0.5 g/mL，冷却后置于4℃冰箱内备用。天王补心混悬液的制备，临用前用蒸馏水制成0.15 g/mL 混悬液，置于4℃冰箱内备用。 2.2 模型建立和分组 将40只SPF级健康的昆明雌性小鼠随机分为4组，每组10只：空白对照组（给予生理盐水），模型对照组（给予生理盐水），天王补心混悬液组（阳性组，给予1.5 g/kg，灌胃给药方式），酸枣仁-黄连水煎剂组（给药组，给予 5 g/kg，灌胃给药方式)。除空白对照组外，其余3组小鼠均腹腔注射PCPA混悬液300 mg/kg，隔日1次，共注射2次。造模小鼠出现毛发变黄，易惊觉，记忆减退，食量减少，体重变轻等改变，表示造模成功。之后开始分别按剂量给药治疗。 2.3 检测指标 给药结束后，脱颈椎处死小鼠，冰上快速取出脑组织，在冰冷生理盐水