实验二通课2012-3-2PPT.pptVIP

内 容 提 要 一. 内毒素（LPS）的检测 二. 肠道致病菌的分离培养 三. 细菌的分布与消毒灭菌 家兔发热法 烦琐、灵敏度不高 ?鲎试验法 操作简便、灵敏度高，可检测小于10ng/ml 的内毒素。 一、内毒素（LPS）的检测（1.5学时） 区别要点 外毒素 内毒素 来源 G+菌,及部分G-菌 G-菌 存在部分 活菌分泌,少数为菌体崩解 为细胞壁成分,菌体崩解 化学成分 蛋白质 脂多糖 稳定性 60-80 ℃,30min被破坏 160 ℃,2-4h被破坏 毒性 强,有选择性,引起特殊表现 较弱,毒性效应大致相同 抗原性 强,可刺激机体产生抗毒素,可被制成类毒素 甲醛处理不形成类毒素 目 的 掌握内毒素检测的方法及临床意义。 临床意义 1.检测输液用品或生物制品中是否含有 内毒素。 2.检测患者是否有革兰氏阴性菌感染引起的内毒素血症（内毒素休克）等。 原 理 鲎（hòu）是一种海洋节肢动物，其血液中含有一种有核变形细胞，这种细胞的胞浆中含有凝固酶原和凝固蛋白原。 内毒素（LPS） 　激 活 凝固蛋白原 凝固蛋白 （溶解状态） （凝胶状态） 凝固酶原 凝固酶 二. 肠道致病菌的分离培养（1.5学时） 病原菌的检验程序 增菌培养 革兰染色 分离培养 接种琼脂斜面纯培养 采集标本 生化试验 血清学试验 动物试验 分析鉴定 革兰染色 观察菌落特征 粪 便→增菌培养（必要时） ↓ SS 培养基 → 革兰染色 ↓ 双糖铁培养基┒ ↓ ↓ 生化反应 血清学鉴定←┛ 肠道杆菌的鉴定程序 1、材料 粪便、ss平板 接种环和酒精灯等。 粪便中病原菌的分离 2、方法 将粪便标本以分区划线法接种到SS培养基，放入37℃温箱中培养24小时。取出 放4 ℃冰箱中保存备用 一.致病性肠道杆菌的生物学性状 二.常见培养基的特性及用途 三.分离培养方法 内 容 提 要 肠道杆菌的生物学性状 埃希菌属：大肠埃希菌 沙门菌属：伤寒沙门菌 甲型、乙型副伤寒沙门菌 志贺菌属：痢疾志贺菌 肠杆菌科重要菌属及代表菌种 大肠杆菌: 生物学性状: G- 镜下为杆状 营养要求不高,可在普通琼脂培养基上生长 最适宜温度为37度,最适宜pH为7.4 肠道杆菌的生物学性状 菌落特点： 圆形，凸起，灰白色，表面光滑，湿润，直径2-3mm。 伤寒杆菌 生物学特性: G- 镜下为杆状 营养要求不高,可在普通琼脂培养基上生长 最适宜温度为37度,最适宜pH为7.4 肠道杆菌的生物学性状 菌落特点: 圆形,凸起,无色透明, 中等大小。 1、相似的形态染色—从形态上无法区别 中等大小的G-杆菌 多有鞭毛、菌毛 肠道杆菌的生物学性状 2、活泼的生化反应 肠道杆菌的生物学性状 乳糖发酵试验 初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌 肠道致病菌 肠道非致病菌 多数不发酵乳糖 多数发酵乳糖 肠道杆菌的生物学性状 -/+ - + 伤寒杆菌 - - + 痢疾杆菌 - ⊕ ⊕ 大肠杆菌 硫化氢 乳糖 葡萄糖 菌名 2、活泼的生化反应 一.常见肠道杆菌的生物学性状 二.常见培养基的特性及用途 三.分离培养方法 二、肠道致病菌的分离培养 SS培养基 胆盐抑制G+,枸橼酸钠和煌绿能抑制大肠杆菌,致病的沙门菌和志贺菌能大量生长。 中性红指示剂和乳糖,中性红遇酸变粉红。 常用于培养肠道致病菌。 常见培养基的特性 SS平板 大肠杆菌 粉红色大菌落 痢疾杆菌 无色细小 半透明菌落 伤寒杆菌 无色细小 半透明菌落 常见培养基的特性 双糖铁培养基上各菌的生长特点 含有乳糖和葡萄糖：产酸产气 含有硫酸亚铁：如细菌分解含硫氨基酸生成 硫化氢，可形成黑色沉淀 酚红指示剂： 酸：黄 碱：红 1)大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气（糖发酵试验），是斜面及底