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牛奶中几种抗生素检测方法 　　(内蒙古科技大学生物与化学工程学院，内蒙古包头014010) 　　摘要：文章就牛奶中抗生素残留的几种检测方法做了一个系统综述，介绍了普通方法、色谱法、免疫法、牛乳发酵活性实验法、Benedict试剂法、DELVOTEST检测法、Deivoteurp试剂等方法。提出，其中色谱法、免疫法及其联用技术在残留分析方面的研究与应用取得了长足进展，在抗生素残留快速检测中效果明显。 关键词：牛奶；抗生素；检测 　　中图分类号：TS207文献标识码：A文章编号：1007—6921(XX)02—0077—03 　　牛奶中抗生素残留问题在世界范围内一直没有被彻底攻克，已成为行业发展以及食品安全的隐患之一。抗生素主要指能抑制或杀死其他微生物的一类化学物质，如青霉素、四环素、金霉素、链霉素、氯霉素、磺胺类药物等。在医学上，抗生素被广泛的应用于预防和治疗多种微生物感染性疾病以及某些癌症。在奶业的源头中，抗生素使用频率很高，特别是治疗牛乳房炎，常常大剂量反复使用。据统计，约有十多种抗生素以一种或多种联合的形式采用粉剂、涂擦剂、注射剂，以及乳导管注入等方式加以应用，导致抗生素残留相当严重，在奶牛饲料中，也含有抗生素添加剂。 　　740)this.width=740border=undefined 　　目前，国内外用于检测奶及奶制品中抗生素残留的方法很多，而为满足奶及奶制品生产需要和遵守新法规，人们对快速检测开始感兴趣，而高效液相色谱法、酶联免疫吸附测定法等方法具有最低检出限量低、准确性好、灵敏性强、重现性好的特点，成为残留分析的主流。 1牛奶中抗生素的弊处 　　牛奶中不允许残留抗生素，主要有两个原因： 　　第一，占人口一定比例的人对抗菌素尤其是青霉素过敏，人们长期饮用或食用抗生素残留的牛奶或奶制品，也就相当于长期低剂量的摄取抗生素，其危害性主要有：①使人体产生耐药性，给今后患病使用抗生素治疗带来不良影响；②抗生素对过敏体质的人会出现过敏反应，危及健康；③破坏人体内正常菌群的平衡状态，使菌群失调，甚至造成二重感染，使重症患者病情难以控制。 　　第二，发酵奶制品的生产依赖于乳酸菌的生长，而乳酸菌的生长受抗菌素的强烈抑制，常导致发酵失败。 2普通方法检测牛奶中抗生素［2］ 2.1枯草杆菌纸片检测法 　　将以吸满受检奶样的滤纸圆片放入一接种枯草杆菌的琼脂平皿上，并放入一含有标准抗生素的阳性对照圆片。将陪替氏培养皿在32℃下培养17～24h，然后观察有无抑菌圈的出现。如在奶样圆片周围有明显的抑菌圈，则判定结果为阳性。为确定其结果是否为真阳性，则须将奶样在82℃下加热2～3min，冷却，再重复实验。加热处理旨在消除自然产生的抑菌性物质的干扰作用，因而可减少假阳性结果的产生。为了确定阳性物质是否为青霉素，对加热后的奶样用青霉素酶处理，以灭活奶样中的青霉素。然后再进行检测，如原来有抑菌作用的奶样不再产生抑菌圈，则证明奶中存在青霉素。如果仍产生抑菌圈,则该抑菌作用是由其他抑菌化合物所致。如果抑菌圈小，但是尚未完全消失，则说明存在不止一种抑菌化合物。该筛选方法的检测限为0.01IU/ml。 2.2溴甲酚紫比色定性检测法 　　溴甲酚紫比色定性检测法全称微细菌抑制定性比色检验法。此法可用于检测奶中β-内酰胺类抗生素。本试验是根据嗜热脂肪杆菌的变种calidolactis的快速生长，以及在其生长过程中同时产生酸的特点而设计的。 　　如果样片中不存在抗菌物质，或抑菌物质的浓度不足以抑制微生物的生长，则在培养基中会产生酸。如果样品中的抑菌物质浓度足以抑制细菌的生长，则在培养基中不会产生酸。酸的产生与否可用溴甲酚紫染料来指示。该染料在酸性基质中既变为黄色。本法对β-内酰胺类抗生素特别敏感，但不能用于检测其他抗生素。在进行样品检测时，需用不含抑菌剂的牛奶配置一系列青霉素标准溶液，其浓度分别为0.002、0.004、0.008、0.010IU/ml。 2.3Charm检测法 　　Charm检测法全称为磺胺药残留Charm抑菌检测法，其原理与上述溴甲酚紫比色定性检测法相同。基本操作过程为：取滤纸圆片，分别吸满受检奶样、含对氨基苯甲酸的奶样、含青霉素酶的奶样、阴性对照奶样和阳性对照奶样，然后将圆纸片放在含指示染料和接种嗜热脂肪芽孢杆菌的培养基上，在64±1℃下培养3h20min，观察比较各圆纸片颜色的变化。结果判定方法如下：阴性对照样品显示黄色，表明无抑菌作用。阳性对照样品显示明亮的紫色，其抑菌圈直径为15～20mm。若受检奶样的抑菌圈直径≥阳性对照样品的抑菌圈，则结果为阳性。若含对氨基苯甲酸的奶样不产生抑菌圈，则受检奶样中含磺胺类药物残留。若含青霉素酶的奶样不产生抑菌圈，则受检样品中含β-内酰胺类抗生素。本测定方法至少能检测≤