动物CYP2C9酶的研究进展及其对双峰驼特异性代谢的潜在意义高飞.DOCVIP

动物CYP2C9酶的研究进展 高 飞1 王 艳1 哈斯苏荣1,2* （1.内蒙古农业大学兽医学院，）、外源性化合物CYP2C9酶的结构、诱导途径、种属间差异、代谢底物剂、抑制剂方面CYP2C9的研究进展，并展望了研究双峰驼CYP2C9酶对其特异性代谢过程中的潜在意义。 关键词：CYP2C9；酶结构；诱导途径；药物法双峰驼 药物代谢酶即药酶，也称肝微粒体混合功能氧化酶，主要存在于肝细胞平滑肌内质网内，由血红素蛋白(P450)、黄素蛋白(NADPH-细胞色素C还原酶)及磷脂三部分组成相对分子质量45000～55000。P450酶系由Klingberg和Gorfinkle1958年发现的由于它在还原状态下可以与CO结合并在波长为450nm时有最大吸收峰[1]并因此而得名。肝脏细胞色素P450氧化酶是负责药物、环境致癌物、外源毒物及内源活性物质生物转化的超家族酶具有重要的药理、生理及病理学意义。在药理学方面，细胞色素P450酶是介导许多药物的主要代谢途径，对体内药物浓度动态变化速率及药物疗效具有重要的影响。在所有已知的生物种群上至少有481个CYP基因和22个假基因，这些CYP基因根据编码蛋白的氨基酸序列同源性，可分为由家族（由阿拉伯数字指定）和亚（用字母标明）。在目前已知的个人类CYP基因分为1、2、3、4、5、7、8、11、17、19、21、24、27、51家族[2]，只有1-家族共种亚家族对于药物和非药物代谢具有重大作用，其余的在内源性化合物的代谢或合成中具有重要的作用，如胆汁酸、生物胺、花生酸、脂肪酸、植物抗毒素、色素和类固醇[2]。P450酶外源性代谢通常表现为特异性或抑制性，但有时也会发生重叠，既为特异性底物又为抑制剂。不同种属间动物CYP同工酶可能因为底物结合中心和酶催化中心氨基酸序列差异，导致同工酶催化底物的选择性差异或亲和力不同，并且这种差异可能导致相同抑制剂对不同种属 CYP 同工酶产生不同效应或不同机制的抑制作用(如竞争性或非竞争性等)。此外，化合物对CYP转录水平的诱导作用多由核受体介导，而核受体结构和信号通路存在种属差异，故诱导剂对不同种属CYP同工酶可能产生不同效应［3］。可见，选择合适动物、特异性探针底物以及诱导剂和抑制剂，对于实验数据外推具有明显影响。 1983年Wang等人从人肝微粒体分离纯化了一种命名为P4508的蛋白[4]，后Umbenhauer等人(1987年)证实这种P4508为CYP2C9[4]，其分子量为53KDa，在兔与其相应的蛋白质命名为CYP2C11，二者具有85%以上的同源性。CYP2C9酶蛋白在肝脏、肠道和呼吸道等有表达，但以肝微粒体表达为主，是人类肝脏中含量丰富的一种CYP酶，仅次于CYP3A，占总量的20%，胚胎肝中检测不到CYP2C9的活性[5]。CYP2C9及其各种等位基因突变体的cDNAs已得到克隆，Umbenhauer等人在1987年首先从人肝组织cDNA文库中分离出CYP2C9的cDNA[4]；同时另一个与CYP2C9在编码区仅有两个氨基酸差异但在3-非编码区与之有较大差别的cDNA由Ged等人(1988年)分离，并命名为CYP2C10[6]。CYP2C10与CYP2C9的结构和功能相似因此二者常以CYP2C9110表示，CYP2C9各种等位基因的cDNAs克隆能在不同生物系统中得到表达，包括酵母COS细胞、HepG2型细胞、杆状病毒、昆虫和大肠杆菌等，这为体外研究CYP2C9生化及其分子生物学特性提供了便利。本文针对CYP2C9亚型酶在酶结构、诱导途径及药物代谢方面进行了简要描述并展望了CYP2C9酶研究对双峰驼的潜在意义。 CYP2C9酶结构 CYP2C9是人类CYP2C亚家族四个已知成员之一，其它3个成员包括CYP2C8，CYP2C18和CYP2C19。细胞色素P4502C8、2C9、2C18和2C19的氨基酸序列同源性大于82%[7]，然而在CYP2C亚型的底物特异性方面具有非常小的重叠性[7]。CYP2C9基因编码490个氨基酸，分子质量为55.6 kDa，有6个底物识别位点，CYP2C9酶蛋白96–117、198–205、233–240、286–304、286-304和470–477。从和酶蛋白结合位点研究，CYP2C9酶对特定底物的代谢可能由底物识别位点的几个关键残基，甚至单个残基所决定。例如，在CYP2C9酶的5号底物识别位点位置发生Ile359Leu替代，会显著降低甲苯磺丁脲和苯妥英的羟基化[8]，而双氯芬那的代谢没有发生变化[9]。 利用细菌酶CYP101的氨基酸序列比对数据和晶体结构构造CYP2C9的初步三维结构模型，虽然对潜在的底物识别位点远端的卟啉进行了鉴定，但该同源性模型在底物结合位的辨别方面预测价值不大[10]。底物与CYP45